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備試劑與收集血樣:
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管,管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產(chǎn)品名稱 | 大鼠維生素B6(VB6)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Rat vitamin B6 (VB6) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9756 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好
用途:科研實驗等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標(biāo)本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
Hs 578T人癌細胞 Hs human breast cancer cell line 578T DMEM+10%FBS琥珀酸;丁二酸質(zhì)量規(guī)格:AR,>99%Succinic acid
ADIPOQ Protein Human 重組人 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)琥珀酸;丁二酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Succinic acid
人胚肺成纖維細胞;MRC-5 QBC-939, 人膽管癌細胞 Humanα-乳香酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品alpha-Boswellic acid
小鼠胚胎成骨細胞前體細胞;MC3T3-E1野馬追內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Eupalinolide A
SERPINC1 Others Cynomolgus 食蟹猴 SerpinC1 / AithrombinIII / ATIII 人細胞裂解液 (陽性對照) 紅霉素C質(zhì)量規(guī)格:美國進口Erythromycin C
IL22RA2 Others Human 人 IL22BP / IL22RA2 人細胞裂解液 (陽性對照) 普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基25克2~8℃,避光
人低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細胞;OCM-1A腺苷;;;腺速苷;胰苷;腺呤配糖;腺尿環(huán)核苷 cdqnosinq 28-61-7
CSF2 Others Human 人 GM-CSF / CSF2 人細胞裂解液 (陽性對照) 雙[三(羥甲基)]基... BIS-TRIS (cell culture tested, ≥98%) 6976-37-0 25G 通用試劑
CoC2(懸浮) 卵巢癌BENZALKONIUMCHLORIDE,50%SOLUTION本扎錄,50%溶液美國國家處方集級白色至淡黃色粘稠液體RT不sigma
COLO 205人結(jié)腸癌細胞 COLO 205 human colon cancer cells 1640+10% FBSFicoll400 10g/25g Pharmacia分裝
PDK4 Others Mouse 小鼠 PDK4 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 黃色氧化shēng huà shì jì容量:500克
肺泡上皮細胞培養(yǎng)基AEpiCM-prf百里酚酞 Thymolphthalein 125-20-2 10G 通用試劑
大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞;BOS-6 羊膜細胞,WISH細胞 786-O [786-0](腎透明細胞腺癌細胞)肖醋銦 INDIUM nitncTq 07398-97-8
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0903BETA-SSA瓊脂shēng huà shì jì容量:RT1米
SPINK4 Others Human 人 SPINK4 人細胞裂解液 (陽性對照) 865-49-6-D,99.8% (Isotopic), contains 1% v/v TMSxlonofonm-D
大鼠維生素B6(VB6)elisa進口試劑盒成纖維細胞生長因子氯吡格雷相關(guān)化合物 BClopidogrel Related Compound B質(zhì)量規(guī)格:美國進口
293FT(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2 支氣管成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)R-(-)-氯吡格雷硫酸氫鹽R-(-)-Clopidogrel Hydrogen Sulfate質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人心臟成纖維細胞cDNAHCF cDNA萘普酮-d3Nabumetone-d3質(zhì)量規(guī)格:美國進口
IL1RL1 Others Human 人 IL1RL1 / ST2 ( isoform A ) 人細胞裂解液 (陽性對照) DL-4-羥基-2-酮戊二酸二鈉鹽DL-4-Hydroxy-2-ketoglutarate di salt質(zhì)量規(guī)格:美國進口
4179 長尾綠猴胚胎細胞3(R,S)-羥基去氧孕13(R,S)-Hydroxy Desogestrel質(zhì)量規(guī)格:美國進口
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