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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產(chǎn)品名稱 | 大鼠維生素A(VA)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Rat vitamin A (VA) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9754 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領(lǐng)域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
Hs888Lu細胞,人肺成纖維細胞 人腎癌細胞系(769-P),769-P細胞 人真皮微血管內(nèi)皮細胞-HDMEC-a9,10-二甲基蒽(標準品)質(zhì)量規(guī)格:分析標準品9,10-Dimethylanthracene
豬胚胎傳代細胞;ST9,10-二苯基蒽(標準品)質(zhì)量規(guī)格:分析標準品9,10-Diphenylanthracene
PDGFC Others Human 人 PDGF-C 人細胞裂解液 (陽性對照) 瓊脂糖(Biowest,電泳級);西班牙瓊脂糖質(zhì)量規(guī)格:進口原裝Biowest 111860;電泳級Agarose
CM-M015小鼠胰島細胞*培養(yǎng)基100mL聚乙二醇400質(zhì)量規(guī)格:BRPEG 400
IFNA2 Others Mouse 小鼠 IFNA2 / Ierferon alpha 2 人細胞裂解液 (陽性對照) 消膽胺樹脂;考來1胺質(zhì)量規(guī)格:Each g exchanges 1.8 g- 2.2 g of glycocholateCholestyramine resin
IGFBP6 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 (His 標簽)鹽酸地芬尼多(標準品)質(zhì)量規(guī)格:供含量測定用Difenidol
HCC38(人導管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 前脂肪細胞培養(yǎng)基PAM鹽酸烏拉地爾質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRUrapidil
腎成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)鹽酸烏拉地爾(標準品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Urapidil
PDE1B Others Human 人 PDE1B 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸氟桂利嗪(標準品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Flunarizine
小鼠骨髓瘤細胞;P3/NSI/1-Ag4-1TFA-aa-dU質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRTFA-aa-dU
C127小鼠細胞 C127 mouse mammary tumor cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS還原輔酶Ⅱ四鈉鹽shēng huà shì jì容量:100克
IL12B Protein Marmoset 重組絨猴 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 標簽)茜素絡(luò)合指示劑 Alizarin complexone,98% 3952-78-1 100MG 通用試劑
SW-13(人腎上腺皮質(zhì)癌細胞) 5×106cells/瓶×2 MCF-7(人癌細胞)酰炳同銦 INDIUM cCqTYLcCqTONcTq 14402-42-9
CM-M068小鼠腎小管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL96孔單條可拆酶標板shēng huà shì jì容量:5毫克
CD27 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD27 / TNFRSF7 人細胞裂解液 (陽性對照) 33685-54-01,1,2,2-氘代四錄1,1,2,2-TETRACHLOROETHANE-D2
大鼠維生素A(VA)elisa進口試劑盒人心臟成纖維細胞裂解物HCFL氯氟吡氧乙酸(標準品)Fluroxypyr質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
C7 Others Human 人 C7 / Compleme compone 7 人細胞裂解液 (陽性對照) 麥穗寧(標準品)Fuberidazole質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
人腦靜脈血管平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL雙氟磺草胺(標準品)Florasulam質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,99.8%
MES-13細胞,小鼠腎小球系膜細胞 K562(慢性髓原白血病) 豚鼠肺細胞;GP-F1增甘膦(標準品)Glyphosine質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
EFNA4 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)氟鈴脲(標準品)Hexaflumuron質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,99%
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