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備試劑與收集血樣:
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準 管 8 管,管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產(chǎn)品名稱 | 小鼠催產(chǎn)素(OT)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Mouse oxytocin (OT) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9838 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好
用途:科研實驗等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標(biāo)本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
FZD4 Others Rat 大鼠 Frizzled-4 / FZD4 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙酰螺旋霉素質(zhì)量規(guī)格:>1200u/mg,CPcetylspiramycin
支氣管成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)尼羅替尼質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRNilotinib
Daudi細胞,人白血病細胞 小鼠腎足細胞,Mouse podocyte細胞 骨骼肌細胞培養(yǎng)基SkMCM-prf草酸銅(>97%,Tech Grade)質(zhì)量規(guī)格:>97%,工業(yè)級Copper(II) oxalate hydrate
NCI-H157(人非小細胞肺腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2無水硫酸銅(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRCopper(II) sulfate, anhydrous
BEL-7404(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M006小鼠肺成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL 人成骨肉瘤細胞;Saos-2肌1;肌酐質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRCreatinine
人臍血間質(zhì)干細胞 Human umbilical cord blood mesenchymal stem cells2,3,6,7,10,11-六(己氧基)苯并菲(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)2,3,6,7,10,11-Hexakis(hexyloxy)triphenylene
U266細胞,人骨髓瘤細胞 串珠鐮刀菌 人胚腎二倍體細胞;HEK-2二萘嵌苯(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)Perylene
TE-11(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2苝(升華提)(>99.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)Perylene (purified by sublimation)
HO-8910(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2 mCF, 小鼠心臟成纖維細胞 人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細胞株(HEK293);APP-PS11,1,4,4-四苯基-1,3-丁二1(>99.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(HPLC)1,1,4,4-Tetraphenyl-1,3-butadiene
人真皮微血管內(nèi)皮細胞裂解物HDMECL8-羥基米氮平β-D-葡萄糖苷酸質(zhì)量規(guī)格:美國進口8-Hydroxy Mirtazapine β-D-Glucuronide
K562細胞,人慢性髓原白血病細胞 倉鼠/小鼠雜交瘤細胞,145-2C11細胞 滑膜細胞培養(yǎng)基SMDTT(DL-DITHIOTHREITOL)二硫蘇糖醇蛋白組學(xué)級5G27565-41-9Frozen
MDA-MB-175VII(人導(dǎo)管癌細胞) 5×106cells/瓶×2鄰錄錄芐 2-Chlorobqnzyl chloridq 611-19-8
AR42J(大鼠胰腺外分泌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R075大鼠主動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL 人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞;WPMY-1TRYPSININHIBITOR,SOYBEAN胰蛋白酶抑制劑,大豆蛋白組學(xué)級10G9035-81-8Frozen
CM-H063人腎皮層上皮細胞*培養(yǎng)基100mL本胺藍(水溶)25克
MAPK12 Others Human 人 ERK3 / MAPK12 / P38-gamma 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 224311-51-72-(二叔丁基膦)聯(lián)本99%2-(Di-tert-butylphosphino)bipxenyl
小鼠催產(chǎn)素(OT)elisa進口試劑盒人十二脂腸腺癌;HuTu-80利福霉素鈉;利福霉素SV鈉Rifamycin salt質(zhì)量規(guī)格:>900IU/mg ,BR
人骨髓間充質(zhì)干細胞(骨髓)(HMSC-bm)(5×105)醋酸奧曲肽Octreotide acetate質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR
CM-R032大鼠腸靜脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mLS(+)-2-氨基-1-丁醇(S)-(+)-2-Ami-butanol 質(zhì)量規(guī)格:>99%,液態(tài),0.944 g/mL ,25℃
小鼠單核巨噬細胞;J774A.1 小鼠肝動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mLD-鞘氨醇trans-D-erythro-sphingosine質(zhì)量規(guī)格:度≥98%
mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞 Mouse糖脂;植物鞘胺醇ribophytosphingosine 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,進口原裝
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