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貨號(hào)	BJ-X97378

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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產(chǎn)品名稱(chēng)	大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)	BJ-X97378

商品屬性：

名稱(chēng) 大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞

2.組織來(lái)源：視網(wǎng)膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺(jué)層組成，兩層間在病理情況下可分開(kāi)，稱(chēng)為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營(yíng)養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺(jué)層是由三個(gè)神經(jīng)元組成。第一神經(jīng)元是視細(xì)胞層，專(zhuān)司感光，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上，而視錐細(xì)胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞，約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過(guò)雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專(zhuān)管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來(lái)自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力*。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞作為視網(wǎng)膜中的主要膠質(zhì)細(xì)胞，大約占視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞的90%，因而在視網(wǎng)膜疾病中起著何種作用也受到越來(lái)越多的關(guān)注。在超微結(jié)構(gòu)水平上，Muller細(xì)胞的胞質(zhì)似乎比臨近的其他細(xì)胞更高的電子密度，更發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細(xì)胞核是典型的卵圓形或多角形。但在不同物種中或同一物種中的不同部位，Muller細(xì)胞形態(tài)也會(huì)有所差異的。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞是一種特化的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，不僅具有維持視網(wǎng)膜的正常結(jié)構(gòu)和功能的作用，并調(diào)制視網(wǎng)膜神經(jīng)元活動(dòng)，還能參與多種病理過(guò)程，尤其是眼底增殖性病變，如增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變等，體外培養(yǎng)Muller細(xì)胞是研究這些增殖性病變途徑之一。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞采用膠原酶消化法和反復(fù)消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-R117

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人抗SS-B/La抗體免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

石斑魚(yú)卵黃蛋白原(VTG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

胰蛋白胨大豆肉湯英文名稱(chēng)：產(chǎn)品規(guī)格：250g

沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（SDB) 英文名稱(chēng)：產(chǎn)品規(guī)格：500ml*20瓶

R3增殖培養(yǎng)基英文名稱(chēng)：產(chǎn)品規(guī)格：250g

小鼠抗胰蛋白(AT)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

小鼠B細(xì)胞活化因子(BAFF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人組蛋白去乙?；?/span>(HDAC)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人羧化不全骨鈣素(ucOC)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人富組糖蛋白(HRG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞Herpes Simplex Virus(HSV)單純皰疹病毒2型LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周phospho-ATG4A(Ser100) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4A抗體規(guī)格: 0.1ml

Penaeus Monodon-type Baculovirus(MBV)斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Rabbit Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Bovine IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1ml

Caulis perillae紫蘇梗LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周Profilin 1 前纖維蛋白1抗體規(guī)格: 0.1mlGMRP1/BTBD10 糖代謝相關(guān)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

狼源性成分探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Angiotensin II 管緊張素Ⅱ抗體規(guī)格: 0.2mlSCN8A/Nav1.6 鈉通道蛋白8α抗體規(guī)格: 0.1ml

Canine Norovirus 犬諾瓦克病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Brs3/Bombesin Receptor 3 蛙皮素受體3抗體規(guī)格: 0.1mlphospho-EGFR (Tyr869) 磷酸化表皮生因子受體抗體規(guī)格: 0.1ml

Phialophora malorum蘋(píng)果邊腐病PCR試劑盒植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周NTAL B淋巴細(xì)胞鏈接激活蛋白抗體規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-human IgG/APC APC標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

Rhizoma polygonati黃精PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周Phospho-Stat4 (Tyr693) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-mouse IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.5ml

Plasmodium malariae三日瘧原蟲(chóng)LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周FAIM2 FAS凋亡抑制分子2 規(guī)格: 0.2mlUCP-2 線粒體脫偶連蛋白2抗體規(guī)格: 0.1ml

Ostertagia trifurcata三叉奧斯特線蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Phospho-Histone H3 (Thr11) 磷酸化組蛋白H3抗體規(guī)格: 0.1mlUBE1/E1 Ubiquitin Activating Enzyme 泛素激活E1抗體規(guī)格: 0.2ml

Herba moslae香薷染料法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周DHPS1 短鏈脫還原1抗體規(guī)格: 0.2mlLRRC62 富含亮重復(fù)蛋白62抗體規(guī)格: 0.2ml