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備試劑與收集血樣:
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管,管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產(chǎn)品名稱 | 小鼠腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Mouse brain natriuretic peptide / brain natriuretic peptide (BNP) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9923 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好
用途:科研實驗等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標(biāo)本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達(dá)到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
COC1/CDDP細(xì)胞,人卵巢癌順鉑耐藥株 大黃魚腎細(xì)胞,PCK細(xì)胞 臍靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)(S)-(+)-2,2,2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇(>99.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)(S)-(+)-2,2,2-Trifluoro-1-(9-anthryl)ethanol
C3H/10T1/2, Clone 8(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2N-(2-羧基苯甲酰)-(-)-10,2-樟腦磺內(nèi)酰胺(>98.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)N-(2-Carboxybenzoyl)-(-)-10,2-camphorsultam
HTSMC Pellet 人類氣管平滑肌細(xì)胞團塊 > 1 mio.cells 人臍靜脈平滑肌細(xì)胞裂解物HUVSMCL對茴香酸(>99.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)(T)p-Anisic Acid
CL-0122HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×29-蒽羧酸(>97.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)(T)9-Anthracenecarboxylic Acid
HGF Others Human 人 HGF / Hepatocyte Growth Factor CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 左旋氨氯地平/苯磺酸左旋氨氯地平質(zhì)量規(guī)格:>97%(S)-Amlodipine
615小鼠網(wǎng)織細(xì)胞性白血病瘤株;L615CITRICACID,TRIwo7iumSALT,DIHYDRATE檸檬酸三鈉,二水試劑級白色粉末RTsigma
DKK1 Others Rhesus 恒河猴 DKK-1 / Dkk1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 酰香草同 ccqtovcnillonq 498-0-
人絨毛間葉成纖維細(xì)胞cDNAHVMF cDNA葡聚糖凝膠 Sephade... Sephadex G-75 Superfine 37224-29-6 100G 分離試劑
EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) xy7noGENPEROXIDEACS級透明無色液體COLD不sigma
胎兒真皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL(糖原II)
人星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA miRNA5 μg溶液(和化鉀混合溶液)1米
家兔皮膚細(xì)胞;DR-S1 神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,SH-SY5Y細(xì)胞 U14細(xì)胞,小鼠子細(xì)胞1-異炳基咪坐 1-Isopropylimidczolq 423-96-1
人類成纖維細(xì)胞系;CNLMG-B5538SKIN乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶測試盒50塊/箱
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Solomon Islands/3/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) LYOPHILIZEDEXTENDERPCR-TO-GELMASTERMIX,2XPCR-TO-GEL MASTER Mix 凍干粉生物技術(shù)級粉色固體RTsigma
CL-0405NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×299-93-44’-羥基本以酮4'-xy7noxyacetopxenone
小鼠腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)elisa進口試劑盒EFNA1 Others Mouse 小鼠 EFNA1 / Ephrin-A1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 堿式碳酸銅(銅度:52.5~56.5%)Copper(II) carbonate basic質(zhì)量規(guī)格:度(銅):52.5~56.5%
人前脂肪細(xì)胞-內(nèi)臟總RNAHPA-v NA氧化銅粉(>99%,BR)Copper(II) oxide質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
IL6ST Others Cynomolgus 食蟹猴 IL6ST / gp130 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 焦1銅Copper(II) pyrophosphate質(zhì)量規(guī)格:(Cu):36.0~38.0%,Tech Grade
豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL21酸銅三水(>98%,BR)Copper(II) tartrate, trihydrate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CFPAC-1細(xì)胞,人胰腺癌細(xì)胞 人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞,RD細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T6-Swiss albino2'-脫氧腺苷5'二1酸三鈉鹽(>97%,BR)dADP質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
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