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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產(chǎn)品名稱 | 豬血栓調節(jié)蛋白(TM)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Porcine thrombomodulin (TM) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G10869 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
人臍靜脈內皮細胞(人膀胱癌細胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304]鹽酸石蒜堿(標準品)質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Lycorine chloride
犬腎細胞;MDCK(NBL-2) 腎上腺皮質細胞,Y1細胞 RCFBF細胞,兔角膜前基質層成纖維細胞鹽酸甜菜堿(標準品)質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Betaine
人胚胎肺成纖維細胞;WI-38鹽酸小檗胺(標準品)質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Berbamine
HA Others H5N8 甲型流感 H5N8 (A/duck/NY/191255-59/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸益母草堿(標準品)質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Leonurine
ACHN, 人腎細胞腺癌細胞鹽酸氟哌噻噸質量規(guī)格:>99%,BRFlupenthixol di
人侵襲性脈絡膜色素瘤細胞;MuM-2C 大鼠內臟脂肪細胞*培養(yǎng)基 100mL馬尿酸鈉培養(yǎng)基100克
M1 小鼠白血病細胞俾氏麥棕Y Biological stain 10114-58-6 25G 通用試劑
PLA2G7 Others Human 人 PLA2G7 / PAFAH 人細胞裂解液 (陽性對照) 炳1醋羌炳酯 xy7noxypropyl ccrylctq 2284-83-
人胚胎肌肉組織來源細胞;CCC-HSM-2草酸鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium oxamate,級別:BR,98%,規(guī)格:25克
FUT8 Others Human 人 FUT8 (aa 68-575) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) PectolaseY-23 100mg/500mg/1g/10g原裝 Yakult.JAPAN
COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞碳酸5克
EB病毒轉化的人B細胞;KM9401 人血管內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL固紅RC Diazo Red RC 68025-25-2 25G 通用試劑
非必需氨基酸 100XNEAA言醋伊立替康 Irinotqccn xy7nochloridq 13627-09-3
MAP2K4 Others Mouse 小鼠 MKK4 / MEK4 / MAP2K4 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 氧化釔100毫克
人小細胞肺癌細胞;NCI-H44658812-37-6川楝素Toosendanin
豬血栓調節(jié)蛋白(TM)elisa進口試劑盒EFNB2A Others Danio rerio (zebrafish) 斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸苯海拉明Diphenhydramine 質量規(guī)格:>98%,BR
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞;PC-12 [PC12]鹽酸苯海拉明(標準品)Diphenhydramine 質量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
MRC-5細胞,人胚肺細胞 大鼠肺上皮Ⅱ型細胞,RLE-6TN細胞 T-109B彈性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL聚肌苷酸Polyinosinic acid質量規(guī)格:≥90.0%,BR
SK-OV-3(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2米屈肼Mildronate,Meldonium質量規(guī)格:>99%,BR,二水合物
HUVEC-c Growth Medium 2 pooled 500,000cells 肺大靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)米屈肼(標準品)Mildronate,Meldonium質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
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