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貨號(hào)	BJ-X97402

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產(chǎn)品名稱	小腦顆粒細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)	BJ-X97402

商品屬性：

名稱 小腦顆粒細(xì)胞

2.組織來源：腦組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

人小腦顆粒細(xì)胞分離自小腦皮層組織；神經(jīng)元是神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)與功能單位，小腦顆粒神經(jīng)元是體積較小的神經(jīng)元，直徑約10μm，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量非常豐富，近乎神經(jīng)元數(shù)量的一半。由于小腦神經(jīng)元的生長、分化和大腦皮層神經(jīng)元相似，而且數(shù)量多、便于取材，因此小腦顆粒神經(jīng)元是研究神經(jīng)元生長發(fā)育、神經(jīng)軸突再生及神經(jīng)疾病發(fā)生機(jī)制和臨床神經(jīng)藥理的重要手段。小腦顆粒神經(jīng)元是小腦主要的中間神經(jīng)元，在哺乳動(dòng)物的小腦內(nèi)數(shù)量最為豐富。顆粒神經(jīng)元的軸突與苔狀纖維和爬行纖維相聯(lián)系，形成小腦皮層內(nèi)的神經(jīng)元環(huán)路，在小腦的神經(jīng)活動(dòng)中起著非常重要的作用。在動(dòng)物傳染性海綿狀腦病中，病變可波及小腦顆粒神經(jīng)元，導(dǎo)致小腦皮層的神經(jīng)元環(huán)路受損，從而呈現(xiàn)神經(jīng)性行為失調(diào)。研究小腦顆粒神經(jīng)元在動(dòng)物傳染性海綿狀腦病病理學(xué)變化中的反應(yīng)、病理發(fā)生的機(jī)理特別是分子機(jī)理，有賴于小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞模型的建立。小腦顆粒細(xì)胞的軸突是沿冠狀軸分布的平行纖維，正是這種排列保證了興奮的單向傳導(dǎo)，這是小腦功能理論中的關(guān)鍵假設(shè)，小腦顆粒細(xì)胞通過g-氨基丁酸接受戈?duì)柤?xì)胞的抑制性突觸的信息傳入。

5.方法簡介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的人小腦顆粒細(xì)胞采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的人小腦顆粒細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含B-27、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-H126

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人骨形成蛋白6(BMP-6)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人空腸彎曲菌(CJ)抗體(IgM)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人Syndecan-3/(SDC3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

牛主要組織相容性復(fù)合體(MHC/BoLA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

雞HSP90抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠牛血清白蛋白(BSA)抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

EC-MUG培養(yǎng)基英文名稱：EC-MUG Med?

小腦顆粒細(xì)胞White Sturgeon Iridovirus(WSIV)高首鱘虹彩病毒LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周NMDAR2B 谷受體2B抗體規(guī)格: 0.1ml

Human Immunodeficiency Virus 2(HIV-2)人免疫缺陷病毒II型A組前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周TNF alpha 瘤壞死因子-α/TNFα抗體規(guī)格: 0.1ml

Nipah Virus(NiV)尼帕病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Phospho-eNOS(Ser1177) 磷酸化氮合成3抗體（內(nèi)皮型）規(guī)格: 0.1ml

芝麻源性成分PCR試劑盒種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周PIH1D1/NOP17 核仁同源蛋白17抗體 0.2ml

Russian Spring-summer Encephalitis Virus俄羅斯春夏腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1mlHCG alpha(4A8) 人絨毛膜促性激素α 亞基單抗規(guī)格: 0.1ml

Rice Yellow Mottle Virus(RYMV)水稻黃斑駁病毒RT-PCR試劑盒植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周PAX6 轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Guinea pig IgG/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Herba taxilli桑寄生PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周CACNB2 L-型電壓依賴型鈣通道β抗體規(guī)格: 0.1mlPDCD2L/MGC13096 程序性細(xì)胞死亡2抗體規(guī)格: 0.2ml

Yersinia pseudotuberculosis假結(jié)核耶爾森LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周EPB42/protein 4.2 紅細(xì)胞膜蛋白4.2抗體規(guī)格: 0.2mlET-1 內(nèi)皮素-1抗體規(guī)格: 0.2ml

Feline Coronavirus(FCoV )貓?zhí)结樂晒舛縍T-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周SynaptotagminVI 突觸蛋白6抗體規(guī)格: 0.1mlTBX-5 轉(zhuǎn)錄因子Tbx5抗體 0.1ml

Rhizoma paridis重樓探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周Phospho-p73(Tyr99) 磷酸化P73瘤抑制基因抗體規(guī)格: 0.1mlIRGM 免疫相關(guān)鳥苷三磷酸基因抗體規(guī)格: 0.2ml

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。