細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

食蟹猴 CDH18 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CDH17 基因全長ORF克隆

食蟹猴 COLEC10 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CLEC4E 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CDH11 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CDH12 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CDH13 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IL17RB 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CCL25 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CCL21 基因全長ORF克隆

Hs-746T (胃癌細胞) 5g 胸腺核苷 Thymidine 室溫干燥避光保存 0.625-40 ng/mL 人母親DDP同源物3 ELISA試劑盒

雙歧桿菌培養(yǎng)基 Bifidobacterium Medium 250g 78-5000 pg/mL 人肌球蛋白調(diào)節(jié)輕多肽9(MYL9)ELISA試劑盒

2 ug pN-YFP pN-YFP 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Embryonic growth/differentiation factor 1

結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(VRBGA) VRBG Agar 250g

1000mL Tris Buffered Saline(TBS),10X,low salt)  Tris Buffered Saline(TBS),10X,low salt)  常溫保存Littman 瓊脂進口、國產(chǎn)Littman Agar用于真菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)250

改良Skirrow氏瓊脂基礎(chǔ) Skirrow Agar Base ,Modified 250g 3.12-200 ng/mL ELISA Kit for Human Glycodelin

2 ug pEGFP1- N1 pEGFP1- N1 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人無翅型MMTV整合位點家族成員5B(WNT5B)ELISA試劑盒

250mL Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.2   Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.2   常溫保存麥康凱瓊脂(不含鹽)    進口、國產(chǎn)Maconkey Agar(without salt)用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)250

2 ug pBlueBacHis2 A pBlueBacHis2 A 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人成纖維生長因子21ELISA試劑盒

2 ug pLVCT-tTR-KRAB pLVCT-tTR-KRAB 低溫運輸，-20℃保存

1次 97孔板血液DNAout（離心）   0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Early growth response protein 1