操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

食蟹猴 PPBP 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CCL24 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CCL19 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IL27RA 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IL7 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IL17RA 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IL11RA 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IL10RA 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IL1A 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IL23R 基因全長ORF克隆

HT-1080 (HT1080) (纖維肉瘤細胞) 2 g NAC（抗氧化劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存匹克     匹克氏肉湯基礎A  進口、國產Pick’s Broth BaseA用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng) （GB標準）100

1瓶 Psi2 DAP株 Psi2 DAP 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL 難辨梭狀芽胞桿菌(Cd)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

葡萄糖酸鹽  20支 125-8000 pg/mL 人胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒

1瓶 A549/Taxol株 A549/Taxol 低溫運輸和保存

500mL Tricine Buffered Saline,5X,pH7.4  Tricine Buffered Saline,5X,pH7.4  常溫保存 0.156-10 ng/mL 人FMS樣激3(Flt3)ELISA試劑盒

2 ug pEYFP pEYFP 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 新型甲型H1N1流感病毒(IAV-H1N1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

100mL DNCTAB溶液，20%   0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Probable D-lactate dehydrogenase, mitochondrial

2 ug pLVX-IRES-Neo pLVX-IRES-Neo 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Methylmalonic Acid

Korser氏肉湯  20支戊烷脒進口、國產加入戊烷脒瓊脂50mg

腸球菌肉湯 Enterococcus Broth 250g 1.56-100 ng/mL 人高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒

2 ug pQE-30LacIq pQE-30LacIq 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Cyclic guanosine monophosphate