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實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

狗 IL20RA 基因全長ORF克隆

狗 IL13RA2 基因全長ORF克隆

狗 IL11RA 基因全長ORF克隆

狗 IL3RA 基因全長ORF克隆

狗 TGFB3 基因全長ORF克隆

狗 BMP5 基因全長ORF克隆

狗 BMP4 基因全長ORF克隆

狗 EFNB2 基因全長ORF克隆

狗 EFNA5 基因全長ORF克隆

狗 CX3CL1 基因全長ORF克隆

HCC827 (非小細胞肺癌細胞) 250mL Gelatin Veronal Buffer (GVB)   Gelatin Veronal Buffer (GVB)   常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Annexin A3

2 ug pBACPAK9 pBACPAK9 低溫運輸，-20℃保存 93.75-6000 pg/mL ELISA Kit for Human Prothrombin

2 ug pDsRed1-N1 pDsRed1-N1 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人轉膠蛋白2(TAGLN2)ELISA試劑盒

500次 BCA法蛋白定量試劑盒 BCA Protein Assay Kit 常溫保存，BSA標準需要-20℃保存馬鈴薯葡萄糖肉湯進口、國產PDB250克用于霉菌和酵母菌的培養(yǎng)

250mL Triton Permeating Solution in PBS,10X Triton Permeating Solution in PBS,10X 常溫保存 31.2-2000 pg/mL 人接觸蛋白1(Contactin-1)ELISA試劑盒

500mL Tris-Tricine-SDS Running Buffer,Cathode,10X Tris-Tricine-SDS Running Buffer,Cathode,10X 常溫保存 15.6-1000 pg/mL 人白介素29(IL-29)ELISA試劑盒

DNA瓊脂 DNase Agar 100 0.78-50 ng/mL 人的兒茶氧位甲基轉移(COMT)ELISA試劑盒

50T 貓弓形蟲PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人磷脂?；嫉鞍拙厶?(Glypican-4)ELISA試劑盒

2 ug pcDNA3 pcDNA3 低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human NAD-dependent deacetylase sirtuin-1

1瓶 RTE株 RTE 低溫運輸和保存

2 ug pJM17 pJM17 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人ADP/ATP移位3(ADP/ATP translocase 3)ELISA試劑盒

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。