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實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學科領(lǐng)域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經(jīng)濟

可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽

小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽

小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽

小鼠 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

小鼠TGF-beta 3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠LCN2 / NGAL 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 SOCS3 基因全長ORF克隆 (表達載

MV3 (黑色素瘤細胞)500mL Phosphate Buffered Saline Dulbecco’s，10X  Phosphate Buffered Saline Dulbecco’s，10X  常溫保存 0.78-50 ng/mL (TMPO)ELISA試劑盒

50次 柱式土壤RNAout Column Soil RNAOUT 4℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Von Hippel-Lindau disease tumor suppressor

20次 一站式GST標記蛋白質(zhì)微量純化套裝（溶破） One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack 介質(zhì)需4℃保存，、Benzonase和PMSF需-20℃保存 0.156-10 nmol/L ELISA Kit for Human Cyclic AMP-responsive element-binding protein 1

BYP瓊脂培養(yǎng)基  250g 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Cytochrome c

O157顯色培養(yǎng)基 O157 chromogenic medium 1000(ML) 78-5000 pg/mL 人Janus激3(JAK3)ELISA試劑盒

大腸菌群顯色培養(yǎng)基 Coliform Chromogenic Medium 1000(ML) 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 24

4次 大提柱式細菌DNAout Maxi Column Bacterial DNAOUT 常溫保存(需要-20℃保存)

250mg 激動素 Kinetin 室溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Zinc transporter 3

25mL 快流速 DEAE- 瓊脂糖凝膠 DEAE-Sepharose Fast Flow 4℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Keratin, type I cytoskeletal 20

瓷珠菌種保存管（20支） Strain Store Medium 20支/盒

尿素卵黃雙糖培養(yǎng)基 Urea- Egg Yolk double sugar Medium 250gLBS 瓊脂進口、國產(chǎn)LBS　agar

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。