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貨號 | BJ-X96620 |
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96620 |
商品屬性:
名稱 PA319 (大腸癌細胞) 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 生長培養(yǎng)基RPMI-1640+10% FBS+1% P/S 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人 IL2Rg 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 ESR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 ITGA2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 ITGA2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 ESR2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 RIPK1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 RIPK1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
人 TMEFF2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 TMEFF2
PA319 (大腸癌細胞)50T 豬肺炎支原體PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人Wnt-10a蛋白(WNT10A)ELISA試劑盒
5g 胸腺 Thymine 室溫避光保存 0.156-10 ng/ml 豬托克特諾病毒(TTV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
2mg Superoxide dismutase(抗氧化) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Endoplasmic reticulum metallopeptidase 1
1瓶 RSC96株 RSC96 低溫運輸和保存 4.69-300 U/L 人胰腺三酰甘油脂肪(Pancreatic lipase)ELISA試劑盒
1瓶 FDC-P1株 FDC-P1 低溫運輸和保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Transforming growth factor beta-1
5g β- 硫代酸 TBA(2-Thiobarbituric Acid) 密封干燥保存 0.156-10 ng/mL 人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒
2 ug pTWIN 1 pTWIN 1 低溫運輸,-20℃保存42℃生長培養(yǎng)基 進口、國產(chǎn)42℃growth Medium用于副溶血性弧菌42℃生長試驗250
產(chǎn)氣莢膜梭菌測定用培養(yǎng)基 Clostridium Perfringens Assay Medium 250g 39-2500 pg/mL 人多萜長醇二寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移(DDOST)ELISA試劑盒
2 ug pFastBac HT-CAT pFastBac HT-CAT 低溫運輸,-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Collagen alpha-1(XV) chain
500mg 崩潰 Driselase From Basidiomycetes sp -20℃保存 0.312-20 ng/mL 麻疹病毒(MV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
2 ug pmirGLO pmirGLO 低溫運輸,-20℃保存
操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
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