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貨號 | BJ-X96624 |
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操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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產品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96624 |
商品屬性:
名稱 SMC-1 (胸膜瘤細胞) 年齡(性別)男 組織來源惡性肋膜間皮瘤 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述SMC-l細胞源自一位病理切片確診為混合型惡性肋膜間皮瘤的43歲患者的切除組織。SMC-l細胞的特征是多態(tài)性和多層生長,群體倍增時間約為32小時。最高的有絲分裂指數為46-50%,SMC-l細胞移植到動物中可以生成在組織學上與原發(fā)灶類似的腫瘤。 生長培養(yǎng)基RPMI-1640+10% FBS+1% P/S 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人 NCSTN 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 BMP-2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
人 BMP-7 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
食蟹猴 CD27 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 HER2 / ErbB2 / CD340 ELISA配對抗體
小鼠 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B ELISA配對抗體
小鼠 IL2RG / CD132 ELISA配對抗體
人 IFNAR1 / IFNAR ELIS
SMC-1 (胸膜瘤細胞)250mL RIPA Buffer with EDTA & EGTA RIPA Buffer with EDTA & EGTA 常溫保存 78-5000 pg/mL 人的載脂蛋白M(APOM)ELISA試劑盒
50次 一站式磁珠法真菌mRNA提取試劑盒
2 ug pYES2.0 pYES2.0 低溫運輸,-20℃保存 1.25-80 ng/mL 人內披蛋白(Involucrin)ELISA試劑盒
2 ug pET-24b(+) pET-24b(+) 低溫運輸,-20℃保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein
Baird-Parker瓊脂平板(9cm) Baird-Parker Agar Base 10個/包 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Sortilin-related receptor
1瓶 DU-145株 DU-145 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Vasodilator-stimulated phosphoprotein
10mL PCR Mix染料 PCR Mix Dye -20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Structural maintenance of chromosomes protein 4
1g 次甲基綠 Methyl Green B 常溫干燥保存
1瓶 MGC-803株 MGC-803 低溫運輸和保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Oncostatin-M-specific receptor subunit beta
10次 克必隆 eTS 核心試劑盒 SureClone eTS Core Kit -20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Gelsolin
2 ug pLenti 6/TR pLenti 6/TR 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人主要穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒
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