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2V6.11 (胚腎細胞)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-05 14:30:09瀏覽次數(shù):77次

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貨號 BJ-X96632
2V6.11 (胚腎細胞) 公司*的商品:肝浸粉 Liver Infusion 100g5 mg AICAR (AMPK激活劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存100mL CHES Buffer,0.5M,pH9.0 CHES Buffer,0.5M,pH9.0 常溫保存5次 PCR法DNA探針辛標記試劑盒 PCR DNA La

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產(chǎn)品名稱

2V6.11 (胚腎細胞) 

規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

貨號

BJ-X96632

商品屬性:

名稱    2V6.11 (胚腎細胞)

種屬人類

年齡(性別)男性,胎兒

組織來源腎;用腺病毒5(Ad5)DNA轉(zhuǎn)化;用腺病毒前區(qū)4質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染

生長特性貼壁細胞

細胞形態(tài)上皮細胞樣

背景描述2V6.11細胞是2001年從人胚腎細胞株293 [HEK-293]衍化而來,293 [HEK-293]細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質(zhì)粒pVgRXR轉(zhuǎn)染得到293pVgRXR細胞。隨后,用包含編碼E4 24KAd5 E4ORF6基因的質(zhì)粒pEKORF6轉(zhuǎn)染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質(zhì)粒pIndHydro衍生而來,載體包含SV40病毒序列。2V6.11細胞株最初從含潮霉素的培養(yǎng)液中用克隆環(huán)分離單克隆得到。2V6.11細胞誘導(dǎo)表達的人腺病毒E4 34KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測;2V6.11細胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。

生長培養(yǎng)基MEM10% FBS1% P/S

推薦傳代比例1:2-1:4

推薦換液頻率2~3/

凍存條件

凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%CO2,5%

溫度:37℃

細胞培養(yǎng)步驟:

.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg 

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。

二.細胞處理:

1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Ficolin-1 / Ficolin-A / FCN1 ELISA配對抗體

EGFR / HER1 / ErbB1 ELISA配對抗體

食蟹猴 CD16 / FCGR3 ELISA配對抗體

Cystatin E / CST6 ELISA配對抗體

BID ELISA配對抗體

VNN2 / Vanin-2 ELISA配對抗體

SULT1B1 ELISA配對抗體

STK4 / MST1 ELISA配對抗體

小鼠 S100A6 ELISA配對抗體

小鼠 PCSK9 ELISA配對抗體

2V6.11 (胚腎細胞) 2 ug pSilencer 5.1-U6 Retro pSilencer 5.1-U6 Retro 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人腎臟雄激素調(diào)節(jié)蛋白(ARP)ELISA試劑盒

50次 脈沖電泳Marker(低范圍PFG)  

50T 星狀病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

5mL dNTP溶液,10 mM dNTP Solution,10 mM -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人白介素10(IL-10)ELISA試劑盒

125mL HEPES Lysis Buffer with Triton,2X HEPES Lysis Buffer with Triton,2X 常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha

50次 FTA血片DNAout  常溫

500mL EBC- Lysis Buffer  EBC- Lysis Buffer  常溫保存 0.156-10 ng/mL 人朊病毒樣蛋白doppel(Prion-like protein doppel)ELISA試劑盒

硅酸鹽細菌培養(yǎng)基 Silicate Bacteria Medium 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human DNA-binding protein Ikaros

1瓶 IR983F株 IR983F 低溫運輸和保存

50T 人黏附分子E-cad基因PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 病毒H9亞型(AIV-H9)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

50T 產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人HLA class II組織適合性抗原DRB1-15βELISA試劑盒

操作要點:

1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。

5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

 


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