細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

人11β羥類(lèi)固醇脫氫1型(11β-HSD1)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

綿羊胰島素(INS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠組織因子與活化7復(fù)合物免疫試劑盒*直銷(xiāo)

大鼠前列腺素E代謝物(PGEM)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

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魚(yú)氧化(COX)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB） 英文名稱(chēng)：Eosin-Methylene Blue Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

緩沖甘油-氯化鈉溶液 英文名稱(chēng)：Buffered glycerol - Sodium Chloride ows\system32\EhStorShell.dll

兔椎間盤(pán)髓核細(xì)胞Fructus sophorae槐角染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周SKA1  紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlUACA  葡萄膜自身抗原Uaca抗體 規(guī)格: 0.2ml

Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒C型LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周MAP3K8/TPL2  絲裂原活化蛋白激激8抗體 規(guī)格: 0.2mlPRMT5  組蛋白甲基轉(zhuǎn)移5抗體 規(guī)格: 0.2ml

Human Herpesvirus-8(HHV-8)人皰疹病毒8型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周RASSF6  RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Cortex acanthopanacis五加皮探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周IRAK1  白介素-1受體相關(guān)激1抗體 規(guī)格: 0.1mlRAB38  G蛋白結(jié)合蛋白R(shí)AB38抗體 規(guī)格: 0.2ml

Piscirickettsia salmonis鮭魚(yú)立克次氏體LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ASBT/SLC10A2  頂膜鈉依賴(lài)性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSSB/La  干燥癥SSB/La抗體 規(guī)格: 0.2ml

Nematodirus helvetianus微黃*線(xiàn)蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CLASP2  細(xì)胞連接相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlMSH Alpha  促黑細(xì)胞激素α抗體 規(guī)格: 0.1ml

Eikenella corrodens嚙蝕艾肯染料法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周TrK A/NTRK1  酪激A抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58)  磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml

Cochliomyia hominivorax嗜人錐蠅LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周C10orf63/Enkurin  10號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框63抗體 規(guī)格: 0.2mlPXR  孤兒核受體PAR1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Brucella bovis牛布魯氏桿探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ROC1/RNF75  環(huán)指蛋白75抗體 規(guī)格: 0.2mlSTIM1  基質(zhì)交分子1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Folium mori桑葉LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周DEDD2  死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlMidkine  中期因子/肝素結(jié)合生因子抗體 規(guī)格: 0.1ml