細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

大鼠 CD83 基因全長ORF克隆

大鼠 CD82 基因全長ORF克隆

大鼠 CD81 基因全長ORF克隆

大鼠 IL7 基因全長ORF克隆

大鼠 IFNGR1 基因全長ORF克隆

大鼠 PVRL2 基因全長ORF克隆

大鼠 CD79B 基因全長ORF克隆

大鼠 CD99 基因全長ORF克隆

大鼠 PROM1 基因全長ORF克隆

大鼠 CSF2RB 基因全長ORF克隆

KLE (子宮內膜癌細胞) 2 ug pBI121-GFP pBI121-GFP 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Follitropin subunit beta

馬丁氏肉湯 Martin Broth 250gBPL瓊脂進口、國產BPL Agar用于食品中沙門氏菌選擇性分離培養(yǎng)(Merck方法)250

100U PreScissiom 蛋白 PreScissiom Protease -20℃保存 15.6-1000 ng/mL 人干擾素α-14(IFN-alpha-14)ELISA試劑盒

2mL 硫酸溶液,15mg/mL Gentamycin Sulfate Solution -20℃避光保存

1瓶 Ramos(RA 1)株 Ramos(RA 1) 低溫運輸和保存BL培養(yǎng)基進口、國產Bile Lactose Broth250克大腸桿菌和綠膿桿菌的增菌培養(yǎng)

250U T7核酸內切 I T7 Endonuclease Ⅰ     -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Histone deacetylase 7

李氏菌增菌肉湯（LB1） Listeria Enrichment Broth Base 9ml*20支/包 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor-binding protein 1

2 ug pGADT7Rec pGADT7Rec 低溫運輸，-20℃保存

2 ug pQETirs-system pQETirs-system 低溫運輸，-20℃保存

2 ug pBlueScript SK（-） pBlueScript SK（-） 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Growth arrest-specific protein 6

100mL MES Buffer,0.5M,pH7.4  MES Buffer,0.5M,pH7.4  常溫保存V-J瓊脂進口、國產Vogel-Johnson Agar病源標本和其它標本中陽性菌的選擇性分離(Merck方法)250