操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價，貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。

商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠 NINJ2 / Ninjurin2 基因全長ORF克隆

大鼠 IL4 基因全長ORF克隆

大鼠 IFNG 基因全長ORF克隆

大鼠 VCAM1 基因全長ORF克隆

大鼠 MDH1 基因全長ORF克隆

大鼠 EDAR 基因全長ORF克隆

狗 CDH11 基因全長ORF克隆

狗 IL10 基因全長ORF克隆

狗 IL4 基因全長ORF克隆

狗 IL18 基因全長ORF克隆

LLC-MK2 (恒河猴腎細胞)MFC瓊脂平板（9cm） MFC Agar 10個/包 62.5-4000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-15 receptor subunit alpha

1瓶 Chang liver株 Chang liver 低溫運輸和保存 31.2-2000 pg/mL 人白介素12B(IL-12/P40)ELISA試劑盒

改良Camp-BAP氏瓊脂添加劑A Modified Camp-BAP Agar additive A 1ml*5 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human TGF-beta receptor type-1

1mL 噻溶液,100mg/mL Cefotaxime Solution -20℃避光保存

250ml Glucose Veronal Buffer (GVB)   Glucose Veronal Buffer (GVB)   常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Keratan sulfate

葡萄糖天門冬素培養(yǎng)基 Glucose Asparagine Medium 250g 0.78-50 ng/mL 人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)ELISA試劑盒

100mL Denhardt溶液，50×（非同位素用） Denhardt Solution, 50× -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Serine/arginine-rich splicing factor 1

2 ug pET-32 Xa/LIC pET-32 Xa/LIC 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)ELISA試劑盒

50次 微量樣品盒 Tiny Sample DNA-RNAOUT 4℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Troponin T, slow skeletal muscle

100mL 核酸印跡膜染液 Nucleic Acid Membrane Stain 常溫酵母浸粉   進口、國產(chǎn)Yeast Extract Powder培養(yǎng)基原材料，提供細菌生長所需的B族250

25mL 聚乙二醇溶液 Poly(Ethylene Glycol Solution) 4℃保存 0.156-10 ng/mL 產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(ETEC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)