操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

食蟹猴 BMP4 基因全長ORF克隆

食蟹猴 TGFB3 基因全長ORF克隆

食蟹猴 TGFB2 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CSF1R 基因全長ORF克隆

食蟹猴 BTC 基因全長ORF克隆

食蟹猴 PDGFC 基因全長ORF克隆

食蟹猴 PDGFB 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CSF1 基因全長ORF克隆

食蟹猴 ANGPTL7 基因全長ORF克隆

食蟹猴 ANGPT2 基因全長ORF克隆

MDBK (NBL-1) (牛腎細(xì)胞)50T 猴痘病毒PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human FAS-associated factor 2

100mg 多核苷酸化 Polynucleotide Phosphorylase -20℃保存 0.625-40 ng/mL 人60S核糖體蛋白(60S ribosomal protein L13)ELISA試劑盒

改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基 Modified KIA Iron Medium 250g

250mL MES Buffer,1.0M,pH8.0   MES Buffer,1.0M,pH8.0   常溫保存Kovacs氏靛基質(zhì)試劑盒進(jìn)口、國產(chǎn)（靛基質(zhì)）試驗(yàn)配套試劑10ml*1

2 ug pEXP-Lib pEXP-Lib 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA試劑盒

Culture培養(yǎng)基 Culture Medium 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Matrix metalloproteinase-28

250mL 通用洗柱液  溴百里藍(lán)乳糖胱瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Cystine-Lactose-Electrolyte Deficient Agar250克尿液中微生物的選擇性分離培養(yǎng)

2 ug pPinPoint-Xa3 pPinPoint-Xa3 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人D二聚體(D2D)ELISA試劑盒

5次 大提無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout Maxi Column Endo-free Plasmid DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存)

NAC液體培養(yǎng)基 NAC Solid Medium 250g 1.56-100 U/L ELISA Kit for Human Heparanase

2 ug pCMV-SPORT6 ST13 pCMV-SPORT6 ST13 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 15.6-1000 U/L 霍亂弧菌(VC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)