細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價(jià)，貨期短，價(jià)格優(yōu)，售后齊全。

商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

人 CD140b / PDGFRb 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

人 LEP R 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽

小鼠 CCL2 / MCP-1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

人 IL23R 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

小鼠 EIF2C2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

人 MMP-9 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

人 ALK-1 / ACVRL1 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆

BC-019 (乳腺癌細(xì)胞)100mL 淋巴分離液A型（人） Lymphocyte Separation Solution A 4℃保存 3.12-200 U/L γELISA試劑盒

5g 中性紅 Neutral Red 室溫保存 93.75-6000 pg/mL 口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

100mL HEPES Buffer,0.5M,pH7.6  HEPES Buffer,0.5M,pH7.6  常溫保存 0.156-10 ng/mL 人鋅指蛋白2(SNAI2)ELISA試劑盒

500mL HCl Buffer,1.0M,pH6.5   HCl Buffer,1.0M,pH6.5   常溫保存 78-5000 pg/mL 人原癌基因蛋白激受體RET ELISA試劑盒

抗生素檢定培養(yǎng)基1號(hào)（低pH) AntibioticAgar  250g 0.625-40 U/L 人線粒體谷脫氫1(GDH 1)ELISA試劑盒

含0.2%可溶性淀粉的BCP脫脂奶粉平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基 BCP Medium with 0.2% Soluble Starch 250g胰牛肉湯進(jìn)口、國產(chǎn)胰牛肉湯1萬毫升/袋制造快疫疫苗用

200 mg Catalase（抗氧化） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(LCN2/NGAL)ELISA試劑盒

2 ug pBNID  pBNID  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Beta-type platelet-derived growth factor receptor

100次 總抗氧化能力檢測試劑盒（ABTS快速法） Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Thymosin beta-4

50次 柱式BAC DNAout  Column BAC DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存) 0.156-10 ng/mL 豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

10mg 辣根過氧化物 Peroxidase Horseradish（POD） 4℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Gastrin