B16細(xì)胞,小鼠黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1.傳代培養(yǎng)時(shí)要注意無(wú)菌操作并防止細(xì)胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每一種細(xì)胞使用一套器材。培養(yǎng)用液應(yīng)嚴(yán)格分開。
2.每天觀察細(xì)胞形態(tài),掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn):健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿,折光性好,生長(zhǎng)致密時(shí)即可傳代。
3.如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象,應(yīng)立即采取措施,一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BSS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗,隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗菌素,并經(jīng)常更換培養(yǎng)基等。
凍存和復(fù)蘇的方法:
細(xì)胞凍存前,仔細(xì)檢查細(xì)胞凍存所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:傳代細(xì)胞單層、適宜生長(zhǎng)液、滅活小牛血清、*溶液、7.5%NaHC03溶液、0.25%*溶液、標(biāo)簽用具:100ml方瓶(培養(yǎng)細(xì)胞用)、克氏瓶、紅翻帽塞、吸管(10ml、lml)、細(xì)胞凍存管、二甲基亞砜、CO2孵箱、超掙臺(tái)、倒置顯微鏡、2~8℃冰箱、-20℃冰箱、液氮罐
細(xì)胞凍存開:
1.細(xì)胞:選對(duì)數(shù)生*細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。
2.計(jì)數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。
4.分裝:分裝入無(wú)菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱,凍存日期,以便日后查找。
B16細(xì)胞,小鼠黑色素瘤細(xì)胞復(fù)蘇方法
1.從液氮罐中取出安剖;有時(shí)因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng),盡快解凍。
3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺(tái)上打開蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。
4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
技術(shù)相關(guān)問(wèn)答:
1. 如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基?培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)??傊?,*MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開始。2. 何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定, 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。 3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無(wú)法存活。4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生*的影響。來(lái)自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。
基本共性:
1、所有的細(xì)胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜,即細(xì)胞膜。
2、所有的細(xì)胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機(jī)器—核糖體,毫無(wú)例外地存在于一切細(xì)胞內(nèi),核糖體,是蛋白質(zhì)合成的機(jī)器,在細(xì)胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細(xì)胞的增殖都以一分為二的方式進(jìn)行分裂。
6、能進(jìn)行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細(xì)胞都具有運(yùn)動(dòng)性,包括細(xì)胞自身的運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞內(nèi)部的物質(zhì)運(yùn)動(dòng)
產(chǎn)品名稱:
產(chǎn)品庫(kù)存:現(xiàn)貨
產(chǎn)品價(jià)格:詢價(jià)
生長(zhǎng)狀態(tài):懸浮
培養(yǎng)條件:DMEM高糖培養(yǎng)基+10%的胎牛血清+1%雙抗
來(lái)源有保障(世界*品牌),狀態(tài)且傳代次數(shù)好,經(jīng)測(cè)試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。每管含有細(xì)胞數(shù)>5×100000cells/ml,具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點(diǎn),純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運(yùn)輸方式:活細(xì)胞運(yùn)輸(T-25 flasks)。
細(xì)胞純度:95%。
細(xì)胞來(lái)源:ATCC等。
包裝:內(nèi)層無(wú)菌自封袋,防壓泡沫盒,外層防壓保溫氣泡袋,說(shuō)明書。
用途: 本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用,不可應(yīng)用于治療等其他方面。
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存.
相關(guān)產(chǎn)品:
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人紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒
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