BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒BCA Protein Assay Kitp0012
      靈敏度高，檢測(cè)濃度下限達(dá)到25 μg/ml，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5 μg，待測(cè)樣品體積為1-20μl。
      在50-2000 μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
      BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%
的Tween 20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無(wú)EGTA，二硫蘇糖醇
(DTT)低于1mM， β-巰基乙醇( β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不適用BCA法時(shí)建議試用碧云天生產(chǎn)的 Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0006)。
     
      每個(gè)試劑盒可以檢測(cè)5000個(gè)樣品。 

包裝清單：

保存條件：
室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。
注意事項(xiàng)：
需酶標(biāo)儀一臺(tái)，測(cè)定波長(zhǎng)為540-595nm之間，562nm。需96孔板。如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但測(cè)定時(shí)，需根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，適當(dāng)加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)減少。
如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請(qǐng)?jiān)囉帽淘铺?/span>Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0006) 。
為了加快BCA法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但是切勿過(guò)熱。
EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時(shí)，請(qǐng)?jiān)囉帽淘铺斓?Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0006) 。

使用說(shuō)明：
1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備
a.取1.2ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一管蛋白標(biāo)準(zhǔn)(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長(zhǎng)期保存。
b.取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取20µl 25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入980µl稀釋液即可配制成0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以-20℃長(zhǎng)期保存。
2.BCA工作液配制
根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5mlBCA試劑A加100 μl  BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
3.蛋白濃度測(cè)定
a.將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 補(bǔ)足到20μl ，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。
b.加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20 μ l。請(qǐng)注意記錄樣品體積。
c.各孔加入200μl  BCA工作液，37℃放置20-30分鐘。
注: 也可以室溫放置2小時(shí)，或60℃放置30分鐘。BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
d.用酶標(biāo)儀測(cè)定A562，或540-595nm之間的其他波長(zhǎng)的吸光度。
e.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

常見(jiàn)問(wèn)題：
1. 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化。
可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)。
2.是否每次測(cè)定時(shí)都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？
建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)锽CA法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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