Enhanced Cell Counting Kit-8，簡稱增強(qiáng)型CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8 而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、靈敏度檢測的試劑盒，比普通的CCK-8試劑盒具有較好的檢測靈敏度和更寬的線性范圍。
WST-8是一種類似于 MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的
formazan(參考圖1) 。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

圖1. WST-8檢測原理圖 (EC=electron coupling reagent ，即電子耦合試劑 )

WST-8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其它 MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。

 MTT 被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；

而WST-8 和 XTT 、MTS 產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。

其次， WST-8 產(chǎn)生的formazan比XTT 和 MTS 產(chǎn)生的 formazan更易溶解。

再次，WST-8比XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。

另外，WST-8和MTT 、 XTT 等相比線性范圍更寬，靈敏度高。
WST-8和WST-1 相比，檢測靈敏度更高，更易溶解，并且相對(duì)穩(wěn)定。
本試劑盒可以用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制檢測。

無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊 96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞，不必收集細(xì)胞，也不必采用額外的步驟去溶解 formazan 。

可以用于大批量樣品的檢測。酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測定無明顯影響。
WST-8對(duì)細(xì)胞無明顯毒性。加入增強(qiáng)型CCK-8 溶液顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，使檢測時(shí)間更加靈活，便于找到測定時(shí)間。
本試劑盒可以測定 2500個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。
注意事項(xiàng)：
由于使用 96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，一定要注意蒸發(fā)問題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的 PBS 、水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把 96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑(例如一些抗氧化劑 ) 會(huì)干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除。
用酶標(biāo)儀檢測前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒有氣泡，否則會(huì)干擾測定。

使用說明：
1. 通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 100微升5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小、細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定 )。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10微升特定的藥物刺激。
2.  每孔加入 10微升增強(qiáng)型CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為 200 微升，則需加入 20微升增強(qiáng)型CCK-8溶液，其它情況以此類推?？梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和增強(qiáng)型 CCK-8 溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。如果擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和增強(qiáng)型 CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。
3. 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育 0.5-4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)就可以了。時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可 以在 0.5 、1、 2 和4 小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4.  在450nm測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用 420-480nm 的濾光片?？梢允褂么笥?/span>600nm的波長，例如 650nm ，作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
5. 將不同數(shù)量的HeLa細(xì)胞按照每孔 100 微升培養(yǎng)液接種到 96孔板中，培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁充分后，每孔加入10微升的增強(qiáng)型 CCK-8 溶液孵育 2小時(shí)后測定A450的檢測效果圖參考圖 2 。檢測效果僅供參考，實(shí)測數(shù)據(jù)會(huì)因檢測儀器等的不同而存在差異。

圖2. 增強(qiáng)型CCK-8 試劑盒測定不同數(shù)量HeLa 細(xì)胞的檢測效果圖。實(shí)測數(shù)據(jù)會(huì)因檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

常見問題：
1. 增強(qiáng)型CCK-8溶液對(duì)細(xì)胞的毒性大小如何？
增強(qiáng)型CCK-8 溶液對(duì)細(xì)胞的毒性非常低，和普通的CCK-8溶液相當(dāng)或者毒性更低，通常觀察不到細(xì)胞毒性。細(xì)胞在 CCK-8法檢測后仍然可以正常生長，并以用于 其它的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。但為了避免增強(qiáng)型 CCK-8溶液可能帶來的對(duì)于后續(xù)檢測的影響，除非該細(xì)胞極難獲得，否則不推薦把增強(qiáng)型CCK-8 溶液孵育過的細(xì)胞用于其它 實(shí)驗(yàn)。
2. 如果吸光度值太低，可以采取什么辦法？
a. 適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量。
b. 延長加入增強(qiáng)型CCK-8 溶液后的孵育時(shí)間。
相關(guān)產(chǎn)品：

本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。