(Trypsin-EDTA 0.25%)(含酚紅)
貨號 規(guī)格 備注
BDXB0020-1 100ml 1×
保存溫度:-20℃
(Trypsin-EDTA)是常用的細(xì)胞分離試劑,為223個(gè)氨基酸組成的單鏈多肽,是原(Trypsinogen)在Lys6和Ile7之間切除氨基N末端6肽(Hexapeptide)得到的。屬于水解酶家族,活化位點(diǎn)包括His46和Ser183,裂解Lysine的羧基末端和 Arginine的氨基末端,水解效率在任何一端存在酸性氨基酸時(shí)降低,而當(dāng)Proline存在于裂解 位點(diǎn)的羧基末端一側(cè)時(shí),水解反應(yīng)不能發(fā)生。的使用pH值為7.2-9.2。
成分 貨號 BDXB0020-1 0.25% EDTA·4Na 0.02g/L 酚紅 N/A
操作步驟
注:使用前將解凍,保存在4℃,建議不要反復(fù)凍融。
1. 移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿中的培養(yǎng)液,用適量不含鈣和鎂離子的PBS或D-PBS快速沖洗細(xì)胞 1-2次,移除培養(yǎng)瓶/皿中的液體;
2. 加入適量(10cm培養(yǎng)皿加入0.5ml),轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶/皿,讓細(xì)胞和充分接觸;
3. 置于37℃培養(yǎng)箱中,孵育1-5min(不同細(xì)胞類型有所不同);
4. 輕輕磕擊培養(yǎng)瓶/皿,在倒置顯微鏡下觀察,大多數(shù)細(xì)胞熒光橙懸浮狀態(tài);
5. 加入培養(yǎng)基,用移液管吹打5-10次,按照實(shí)驗(yàn)要求將細(xì)胞種植到新的培養(yǎng)瓶/皿中。
注意事項(xiàng)
1. 對細(xì)胞有損傷,應(yīng)盡量縮短孵育時(shí)間;
2. 如果細(xì)胞培養(yǎng)在不含血清的培養(yǎng)基中,消化完畢,加入PBS,500×g離心10分鐘, 移除PBS,將細(xì)胞重懸于所用的培養(yǎng)基中。
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