實驗步驟:
A. 配制37℃ K-H液(1.25 CaCl2,130 NaCl,5.4 KCl,11 葡萄糖,0.5 MgCl2,0.5 NaH2PO4及25 NaHCO3),向K-H液中通入95%O2-5% CO2氣體,緩沖液PH 值為7.4,并取部分K-H液放入冰箱中,使其溫度降到4℃。
B. 清潔Langendorff管路,每次使用前先用1000ml蒸餾水沖洗,打開水浴循環(huán),再用K-H液將整個管路系統(tǒng)進行沖洗。
C. 魯米鈉腹腔注射麻醉動物(100mg/kg),并向肝靜脈注射100IU肝素,頸動脈放血處死動物,同時快速分離心臟,放入4℃K-H液中擠凈血液并稱重。
D. 將心臟迅速固定在Langendorff 灌流系統(tǒng)中,通過主動脈以85cmH2O壓力逆行灌注,通過肺靜脈插入導(dǎo)管至左心房。
E. 心臟復(fù)跳后,將一個球囊插入心臟左心室,球囊和壓力換能器相連,在電腦上記錄左室內(nèi)壓,調(diào)整左室舒張內(nèi)壓(LVEDP)在4~10mmHg之間。待心臟左室收縮壓(LVESP)穩(wěn)定后且大于80mmHg,心率大于200次/分,可繼續(xù)實驗,并記錄心電圖(ECG)、主動脈流量(AF)、冠脈流量(CF)、左室收縮末壓(LVESP)等指標(biāo)。
F. 缺血再灌注方案:關(guān)閉灌流液,停灌心臟45min后,打開灌流液進行復(fù)灌90min(復(fù)灌起始15min通過肺靜脈給予一定的壓力輔助),同時記錄相關(guān)指標(biāo)。
G. 實驗結(jié)束后,用蒸餾水沖洗整個管路系統(tǒng),防止K-H液殘留在管路中。