離體心臟灌流系統(tǒng)適用于離體哺乳動(dòng)物心臟灌流(langendorff氏法)和離體心臟冠脈流量(coronaryfilw.cf)的測(cè)定.可直接進(jìn)行恒壓灌流,加上蠕動(dòng)泵可進(jìn)行恒流灌流.
實(shí)驗(yàn)步驟:
A. 配制37℃ K-H液(1.25 CaCl2,130 NaCl,5.4 KCl,11 葡萄糖,0.5 MgCl2,0.5 NaH2PO4及25 NaHCO3),向K-H液中通入95%O2-5% CO2氣體,緩沖液PH 值為7.4,并取部分K-H液放入冰箱中,使其溫度降到4℃。
B. 清潔Langendorff管路,每次使用前先用1000ml蒸餾水沖洗,打開(kāi)水浴循環(huán),再用K-H液將整個(gè)管路系統(tǒng)進(jìn)行沖洗。
C. 魯米鈉腹腔注射麻醉動(dòng)物(100mg/kg),并向肝靜脈注射100IU肝素,頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物,同時(shí)快速分離心臟,放入4℃K-H液中擠凈血液并稱重。
D. 將心臟迅速固定在Langendorff 灌流系統(tǒng)中,通過(guò)主動(dòng)脈以85cmH2O壓力逆行灌注,通過(guò)肺靜脈插入導(dǎo)管至左心房。
E. 心臟復(fù)跳后,將一個(gè)球囊插入心臟左心室,球囊和壓力換能器相連,在電腦上記錄左室內(nèi)壓,調(diào)整左室舒張內(nèi)壓(LVEDP)在4~10mmHg之間。待心臟左室收縮壓(LVESP)穩(wěn)定后且大于80mmHg,心率大于200次/分,可繼續(xù)實(shí)驗(yàn),并記錄心電圖(ECG)、主動(dòng)脈流量(AF)、冠脈流量(CF)、左室收縮末壓(LVESP)等指標(biāo)。
F. 缺血再灌注方案:關(guān)閉灌流液,停灌心臟45min后,打開(kāi)灌流液進(jìn)行復(fù)灌90min(復(fù)灌起始15min通過(guò)肺靜脈給予一定的壓力輔助),同時(shí)記錄相關(guān)指標(biāo)。
G. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,用蒸餾水沖洗整個(gè)管路系統(tǒng),防止K-H液殘留在管路中。