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無菌接種步驟:
1.將初步洗滌及切割的材料放入燒杯,帶入超凈臺(tái)上,用消毒劑滅菌,再用無菌水沖洗,后瀝去水分,取出放置在滅過菌的紗布上或?yàn)V紙上。
2.材料吸干后,一手拿鑷子、一手拿剪刀或*,對(duì)材料進(jìn)行適當(dāng)?shù)那懈?。如葉片切成0.5cm平方的小塊;莖切成含有一個(gè)節(jié)的小段。微莖尖要?jiǎng)兂芍缓?~2片幼葉的莖尖大小等。在接種過程中要經(jīng)常灼燒接種器械,防止交叉污染。
3.用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養(yǎng)基上。具體操作過程(以試管為例)是:先解開包口紙,將試管幾乎水平拿著,使試管口靠近酒精燈火焰,并將管口在火焰上方轉(zhuǎn)動(dòng),使管口里外灼燒數(shù)秒鐘。若用棉塞蓋口,可先在管口外面灼燒,去掉棉塞,再燒管口里面。然后用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內(nèi),輕輕插入培養(yǎng)基上。若是葉片直接附在培養(yǎng)基上,以放1~3塊為宜。至于材料放置方法除莖尖、莖段要正放(向上)外,其他尚無統(tǒng)一要求。接種完后,將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒種。并用棉塞,塞好后,包上包口紙,包口紙里面也要過火。