商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/24樣 |
檢測(cè)方法 | 可見(jiàn)分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6720 |
商品介紹:
測(cè)定意義
海藻糖是功能性低聚糖,具有非還原性、保濕性、熱酸穩(wěn)定性、抗凍結(jié)性等特性,是細(xì)胞在不良環(huán)境條件下產(chǎn)生的一種重要的抗逆應(yīng)激物之一,它對(duì)生物大分子和生物體組織有著非特異性的保護(hù)作用。海藻糖合成酶(Trehalose Synthase)催化麥芽糖合成海藻糖,是海藻糖生物合成的關(guān)鍵途徑之一。
測(cè)定原理:
TS催化麥芽糖產(chǎn)生海藻糖,使用糖化酶分解剩余麥芽糖為葡萄糖,通過(guò)葡萄糖氧化酶法測(cè)定葡萄糖含量,按照麥芽糖減少的量表示海藻糖合酶活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
5-基苯酞 97%亞鈉 CP(劇品)Tenascin 固生蛋白抗原
2-氯烯 99%仲丁 99%TEM 1/CD248(Tumor endothelial marker 1 precursor) 內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液酸蛋白抗原
2--3-甲基吡 98%N,N-二甲基乙 99%TFF3 (trefoil factor3) 三葉肽因子3(多肽)
2-氯甲基-3,5二甲基-4-甲氧基吡鹽酸鹽 98%異佛爾酮二 99%TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor-2) 組織因子途徑抑制劑-2抗原
環(huán) 98%乙酰乙酸基烯酸乙酯 95%TIEG1/KLF10(TGF-beta inducible early response gene 1) TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗原
環(huán)基酮 98%2,2-雙(羥甲基)酸 98%TGF- BetaR1/ALK (TGF-beta receptor type I) 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體1抗原
4-氯-4'-氟苯丁酮 97%1,4-丁二 AR,98%Thioredoxin 1(ERdj5) 硫氧還蛋白抗原
6-氯-2-己酮 98%1,3-丁二 99%Tie1/JTK14 peptide 上皮生長(zhǎng)因子樣域激1抗原
海藻糖合成酶(TS)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒α干擾素(IFN-α)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大皰性類天皰瘡抗體(BP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
豚鼠內(nèi)皮素1(ET-1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
豬基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
分泌性白細(xì)胞蛋白抑制因子(SLPI)免疫試劑盒*直銷
大鼠酪蛋白激JAK3(Jak3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
綿羊孕激素/孕酮(PROG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
犬結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
胃泌素(Gastrin)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。