實驗操作步驟：
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
公司向您推薦PrimaCell™人脂肪細胞試劑盒的詳細說明：
產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™人脂肪細胞試劑盒 |
規(guī)格 | 6次/盒 |
貨號 | YS-X6675 |
細胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長特性，在適當?shù)臅r候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
植物染色質(zhì)免疫沉淀分析（CHIP）*試劑盒（包括抗體） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次
石蠟切片少突膠質(zhì)細胞（OLIGODENDROCYTE）O4抗體免疫組化染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次
鈣離子膜通道內(nèi)質(zhì)網(wǎng)肌醇1,4,5-三受體（IP3R）功能熒光檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
植物種子活性葉綠體分離試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
植物a-淀粉酶（a-AMYLASE）活性CNPG3比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
氫離子膜通道轉(zhuǎn)運功能（P型ATP酶）藍色熒光檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
細胞人體腺病毒（adenovirus）定性檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
冰凍切片神經(jīng)纖維銀染試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
冰凍切片組織CDK6蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
組織科薩基病毒B（Coxsackievirus B）定量PCR擴增檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
冰凍切片肌腺苷酸脫氨酶（Myoadenylate deaminase）活性染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
胞漿內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
PrimaCell™人脂肪細胞試劑盒尼群地平 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg
尼卡地平 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg
雙硫化物 檢查用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 50mg
匹多莫德 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg
醋唑 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg
阿托伐他汀鈣 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg
酮可可堿 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg
氯波必利 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 50mg
異司特 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 50mg
醋氨鋅 供檢查用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg
異環(huán)磷酰 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg
二倍他米松 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
