問:常用的DNA 濃度及純度檢測方法有哪些?
lambda(λ)DNA5μg品牌稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會偏低,因為pH 值和離子存在會影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長片段回收時應注意哪些問題?
答:lambda(λ)DNA5μg品牌當DNA 段長度較長(5 kb 以上)時,回收效率會有所下降,這是DNA 切膠回收時的常見現(xiàn)象。此時建議按以下方法解決問題:
1 適當增加待回收DNA 樣品的點樣量;
2 由于長段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對長段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時不要將DNA 長時間暴露在紫外等下。
lambda(λ)DNA5μg品牌的詳細介紹:
DNA提取流程圖:
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公司lambda(λ)DNA5μg品牌的RNA/DNA提取目錄有下面10個系列,5000余種產品:點擊了解更克隆及表達。
1、RNA純化系列產品
2、DNA純化系列產品
3、電泳及回收系列產品
4、探針標記及檢測系列產品
5、核酸擴增系列產品
6、克隆表達系列產品
7、基因組研究系列產品
8、蛋白質研究系列產品
9、細胞生物學研究系列產品
10、即用型溶液、質粒庫、菌種庫等等
實驗步驟:
(1)lambda(λ)DNA5μg品牌實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
注意事項:
● lambda(λ)DNA5μg品牌溶液PE *次使用前請按瓶上標簽加入4 倍體積的無水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產品對電泳使用的Agarose 種類沒有嚴格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點的Agarose 等。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請適當延長電泳時間,在條帶分離清晰后進行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時應盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應等,不會影響后續(xù)試驗。
● 為了保證回收效率,請不要使用未調整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請嚴格按照操作步驟操作。
4'-基酮(>97.0%(GC)) 4'-Butylacetophenone 37920-25-5 質量規(guī)格:>97.0%(GC)
4-基醛(>95.0%(GC)) 4-Butylbenzaldehyde 1200-14-2 質量規(guī)格:>95.0%(GC)
4-基-4'-羥基查耳酮(>98.0%(HPLC)) 4-Butyl-4'-hydroxychalcone 385810-21-9 質量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
4-差向土霉素 4-Epioxytetracycline 14206-58-7 質量規(guī)格:美國進口
4-差向-四環(huán)素-d6 4-epi-Tetracycline-d6 79-85-6 (unlabeled) 質量規(guī)格:美國進口
4-差向-四環(huán)素 4-Epi-Tetracycline 79-85-6 質量規(guī)格:美國進口
4-差向-地美環(huán)素 4-epi-Demeclocycline 14206-59-8 質量規(guī)格:美國進口
4-氧基醛(>97.0%(GC)) 4-Propoxybenzaldehyde 5736-85-6 質量規(guī)格:>97.0%(GC)
4-氧基二腈(>95.0%(GC)) 4-Propoxyphthalonitrile 106144-18-7 質量規(guī)格:>95.0%(GC)
4-表米諾環(huán)素 4-Epi Minocycline 43168-51-0 質量規(guī)格:美國*
4'-芐氧基卡維地洛 4'-Benzyloxy Carvedilol 887352-95-6 質量規(guī)格:美國進口
4-芐氧基醛(>98.0%(GC)) 4-Benzyloxybenzaldehyde 4397-53-9 質量規(guī)格:>98.0%(GC)
4-酰-4'-基二醚(>98.0%(GC)) 4-Benzoyl 4'-Methyldiphenyl Sulfide 83846-85-9 質量規(guī)格:>98.0%(GC)
4-酰-4'-基二醚(>98.0%(GC)) 4-Benzoyl 4'-Methyldiphenyl Sulfide 83846-85-9 質量規(guī)格:>98.0%(GC)
4-基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(含氮量:23.50-24.30 %) 4-Phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione 4233-33-4 質量規(guī)格:含氮量:23.50-24.30 %
4-氨基鄰二腈(>98.0%(N)) 4-Aminophthalonitrile 56765-79-8 質量規(guī)格:>98.0%(N)
4-氨基安替比林 4-Aminoantipyrine 30505 質量規(guī)格:AR,分析純
4-氨基-5-咪唑酰 5-Amino-4-imidazolecarboxamide 360-97-4 質量規(guī)格:>98%(滴定)
4-氨基-4'-二醚(>97.0%(GC)(T)) 4-Amino-4'-chlorodiphenyl Ether 101-79-1 質量規(guī)格:>97.0%(GC)(T)
lambda(λ)DNA5μg品牌5-HydroxyRosiglitazone規(guī)格:美國進口
5-HydroxyPropranololHydrochloride規(guī)格:美國進口
5-HydroxyOmeprazoleSodiumSalt規(guī)格:美國進口
5'-HydroxyMeloxicam規(guī)格:美國進口
5-HydroxyLornoxicam規(guī)格:美國進口
5-HydroxyIndapamide規(guī)格:美國進口
5-HydroxyDesloratadine規(guī)格:美國進口
5-HydroxyDantrolene規(guī)格:美國進口
5-HTP規(guī)格:≥98.0%,標準品,L構型
5-HIAA規(guī)格:>98.0%,進分