問:常用的DNA 濃度及純度檢測(cè)方法有哪些?
M13mp18DNA10μg品牌稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對(duì)比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測(cè)OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時(shí)不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長(zhǎng)片段回收時(shí)應(yīng)注意哪些問題?
答:M13mp18DNA10μg品牌當(dāng)DNA 段長(zhǎng)度較長(zhǎng)(5 kb 以上)時(shí),回收效率會(huì)有所下降,這是DNA 切膠回收時(shí)的常見現(xiàn)象。此時(shí)建議按以下方法解決問題:
1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點(diǎn)樣量;
2 由于長(zhǎng)段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對(duì)長(zhǎng)段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時(shí)不要將DNA 長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外等下。
M13mp18DNA10μg品牌的詳細(xì)介紹:
DNA提取流程圖:
?
公司M13mp18DNA10μg品牌的RNA/DNA提取目錄有下面10個(gè)系列,5000余種產(chǎn)品:點(diǎn)擊了解更克隆及表達(dá)。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測(cè)系列產(chǎn)品
5、核酸擴(kuò)增系列產(chǎn)品
6、克隆表達(dá)系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫、菌種庫等等
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)M13mp18DNA10μg品牌實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
注意事項(xiàng):
● M13mp18DNA10μg品牌溶液PE *次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對(duì)電泳使用的Agarose 種類沒有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點(diǎn)的Agarose 等。
● 電泳時(shí)請(qǐng)使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間,在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時(shí)應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會(huì)偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
● 為了保證回收效率,請(qǐng)不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作。
4-去氧基奧美拉唑化物 4-Desmethoxy Omeprazole Sulfide 704910-89-4 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-去氧基-4-基奧美拉唑化物 4-Desmethoxy-4-nitro Omeprazole Sulfide 142885-91-4 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-去氧基-4-代奧美拉唑化物 4-Desmethoxy-4-chloro Omeprazole Sulfide 220757-74-4 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-去氧基-4-代奧美拉唑 4-Desmethoxy-4-chloro Omeprazole 863029-89-4 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4'-去鬼臼毒素 4'-Demethylpodophyllotoxin 40505-27-9 質(zhì)量規(guī)格:標(biāo)準(zhǔn)品,用于含量測(cè)定
4-羥基左旋咪唑 4-Hydroxy Levamisole 69359-04-2 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4'-羥基鹽酸曲唑酮 4'-Hydroxy Trazodone HCl 53818-10-3 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-羥基心得安β-D-葡萄糖苷酸 4-Hydroxy Propranolol β-D-Glucuronide 94731-13-2 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-羥基纈沙坦(非對(duì)映異構(gòu)體混合物) 4-Hydroxy Valsartan (Mixture of Diastereomers) 188259-69-0 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-羥基(>98%,BR) 4-Hydroxycoumarin 1076-38-6 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
4'-羥基托莫西汀β-D-葡萄糖苷酸 4'-Hydroxy Atomoxetine β-D-Glucuronide 540729-08-6 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4'-羥基托莫西汀 4'-Hydroxy Atomoxetine 435293-66-6 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4'-羥基它莫西芬 4'-Hydroxy Tamoxifen 82413-23-8 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-羥基炔雌醇 4-Hydroxy Ethynyl Estradiol 50394-90-6 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4'-羥基偶氮-2-羧酸(>98.0%(HPLC)(T)) 4'-Hydroxyazobenzene-2-carboxylic Acid 1634-82-8 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
4-羥基尼索地平 4-Hydroxy Nisoldipine 106685-70-5 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4'-羥基尼美舒利 4'-Hydroxy Nimesulide 109032-22-6 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-羥基鄰二腈(>97.0%(GC)) 4-Hydroxyphthalonitrile 30757-50-7 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)
4-羥基雷美替 4-Hydroxy Ramelteon 1204581-50-9 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
M13mp18DNA10μg品牌6,7-Dihydroxycoumarin規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
6,7-Dihydroxycoumarin規(guī)格:HPLC≥98%
6,7,8,9DehydroPaliperidoneHydrochloride規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
6,12-Dibromochrysene規(guī)格:>98.0%(HPLC)
6'-(Diethylamino)-1',3'-dimethylfluoran規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
6'-(Diethylamino)-1',2'-benzofluoran規(guī)格:>98.0%(GC)(T)
5'-UMP-Na2規(guī)格:>99%,BR
5'-tert-ButyldimethylsilyloxyMeloxicam規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-TAMRA,SE規(guī)格:>90%
5-Phenyl-2,4-pentadienoicacid規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品