備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產(chǎn)品名稱 | 人肌球蛋白(Myosin)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Human myosin (Myosin) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G10420 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好
用途:科研實驗等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
IgG2b Others Mouse 小鼠 IgG2b-Fc 人細胞裂解液 (陽性對照) 外消旋2-羥基布洛芬質(zhì)量規(guī)格:美國進口rac 2-Hydroxy Ibuprofen
小鼠胃粘膜上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL1-羥基布洛芬(布洛芬雜質(zhì)))(非對映)質(zhì)量規(guī)格:美國進口1-Hydroxy Ibuprofen (Ibuprofen Impurity L)(Mixture of Diastereomers)
OP9小鼠骨髓基質(zhì)細胞 OP9 mouse bone marrow somal cells a-MEM培養(yǎng)基+20%FBS1-含氧的布洛芬質(zhì)量規(guī)格:美國進口1-Oxo Ibuprofen
LIF Protein Mouse 重組小鼠 LIF 蛋白 (His 標簽)羧酸布洛芬(非對映)質(zhì)量規(guī)格:美國進口Ibuprofen Carboxylic Acid(Mixture of Diastereomers)
RT4(人膀胱移行細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 T-24(膀胱變移細胞癌)知母皂苷BII(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Timosaponin BII
CM-R058大鼠膀胱上皮細胞*培養(yǎng)基100mL高鹽察氏瓊脂10克RT
MCG803細胞,人胃腺癌細胞 人腦膠質(zhì)瘤細胞系,U373細胞 非洲綠猴腎細胞;VERO-761-基-3-肖基-1-亞肖基胍(+4℃) 1-Mqthyl-3-nit-nitnosogucnidinq 1970/2/7
COLO 205(人結(jié)腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2苞肉粒1米
CD14 Others Mouse 小鼠 CD14 人細胞裂解液 (陽性對照) HippuricAcidN-本甲酰甘酸5克BR,99%
人前脂肪細胞-皮下RNAHPA-s miRNA5 μg1314-15-4氧化鉑(IV)單水合物Platinum dioxide
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY1036Rink-AmideresinRink-Amide樹脂25克BR
ICAM3 Others Human 人 CD50 / ICAM3 人細胞裂解液 (陽性對照) 氮雜環(huán)丁烷-3-加醋酯言醋鹽 3-cZqTIDINqCcRBOXYLIC cCID, MqTHYL qSTqR, xy7noCHLORIDq 1000-39-9
CM-R013大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mLpotewwiumsorbate2,4-己二1酸鉀1公斤BR
UNC5B Others Rat 大鼠 UNC5B / UNC5H2 人細胞裂解液 (陽性對照) DNABuffer脫氧核糖核酸緩沖液25克高,98%
人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞HREC8047-15-2皂草苷Saponin
人肌球蛋白(Myosin)elisa進口試劑盒5E Others Rat 大鼠 CD73 / 5E 人細胞裂解液 (陽性對照) 毛萼乙素Eriocalyxin B質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
人胚肺二倍體細胞;KMB-17知母皂苷元Sarsasapogenin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
A498細胞,人腎癌細胞系 蝙蝠肺細胞,Tb 1 Lu細胞 CL-0430RS1(大鼠皮膚成纖維樣細胞)5×106cells/瓶×24'-去甲鬼臼4'-Demethylpodophyllotoxin質(zhì)量規(guī)格:標準品,用于含量測定
EA.hy926(人臍靜脈細胞融合細胞) 5×106cells/瓶×2杠柳毒苷Periplocin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
hMoCD14+-PB-c single donorpre-screened 外周血來源的人類CD14+單核細胞,單一來源,預(yù)選型 10 million 人結(jié)膜成纖維細胞HConF1,2-二亞油酰甘油1,2-Dilinoleoylglycerol 質(zhì)量規(guī)格:美國進口原裝
我司供應(yīng)的elisa進口試劑盒免費代測,全程ELISA試劑盒實驗技術(shù)指導(dǎo),免費代做實驗,索取產(chǎn)品說明書。