?儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,產品僅用于科研請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
龜分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
產品名稱 | 龜分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Mycobacterium cheloei |
貨號 | CP914587 |
相對定量簡介:
分析方法: ①雙標曲法 ②2 - △Ct ③2 - △△Ct ④Pfaffi法
①雙標準曲線法簡介
公式:
優(yōu)點:分析簡單,實驗優(yōu)化簡單
缺點:對每一個基因,每一輪實驗都必需做標準曲線;必需有固定的標準品做標準曲線;這些標準品并不代表樣品擴增的真實狀態(tài)應用:基因表達調控研究中與*的兩種相對定量方法之一
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟:
(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質粒載體上,構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線;
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數,計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值,即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質粒載體上,構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域,其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題,提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為:待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數,計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值,即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法,所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
樣品要求及注意事項:
1、 如果提供實驗材料,實驗材料必須保證新鮮,請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細胞:5×106動植物,酵母細胞或細菌細胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進行評估。
4、 實時熒光定量PCR服務您一定要提供樣品及要擴增基因的詳細信息。
鹽金剛乙胺標準品 英文名稱:Rimantadine Hydrochloride :1501-84-4
利魯唑相關物質A標準品 英文名稱:Riluzole Related Compound A :461-82-5
利魯唑標準品 英文名稱:Riluzole :1744-22-5
利福平醌標準品 英文名稱:Rifampin Quinone :13983-13-6
利福平標準品 英文名稱:Rifampin :13292-46-1
利福布丁標準品 英文名稱:Rifabutin :72559-06-9
D-核糖標準品 英文名稱:Ribose :50-69-1
維生素B2標準品 英文名稱:Riboflavin (Vitamin B2) :83-88-5
利巴韋林標準品 英文名稱:Ribavirin :36791-04-5
棕櫚視黃酯標準品 英文名稱:Retinyl Palmitate :
間二酚標準品 英文名稱:Resorcinol :108-46-3
利血平標準品 英文名稱:Reserpine :50-55-5
瑞格列標準品 英文名稱:Repaglinide :135062-02-1
甜菊雙糖甙A標準品 英文名稱:Rebaudioside A :58543-16-1
蛇根木標準品 英文名稱:Rauwolfia Serpentina :8063-17-0
核氧化8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)高效液相色譜(HPLC)分析試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
細胞內核氧化8-羥基鳥苷(8-OHG)比色法測定試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
細胞內核氧化8-羥基鳥苷(8-OHG流式細胞分析試劑盒 進口/國產 規(guī)格:10次
核氧化8-羥基鳥苷(8-OHG)ELISA分析試劑盒 進口/國產 規(guī)格:48/96次
冰凍切片核氧化8-羥基鳥苷(8-OHG)熒光染色測定試劑盒 進口/國產 規(guī)格:10次
石蠟切片核氧化8-羥基鳥苷(8-OHG)熒光染色測定試劑盒 進口/國產 規(guī)格:10次
核氧化8-羥基鳥苷(8-OHG)高效液相色譜(HPLC)分析試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
細胞內核氧化8-氧鳥苷(8-oxo-G)比色法測定試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
細胞內核氧化8-氧鳥苷(8-oxo-G)流式細胞分析試劑盒 進口/國產 規(guī)格:10次
核氧化8-氧鳥苷(8-oxo-G)ELISA分析試劑盒 進口/國產 規(guī)格:48/96次
龜分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒Ehyl2-(6-Amino-2,3-dichlorobenzyl)glycine(AnagrideImpuriyA) 乙基2-(6-氨基-2,3-二氯芐)甘氨酸(阿那格雷雜質A) 規(guī)格:脫乙酰度是80%,粘度800
5-AceoxyAnagride 5-乙酰氧基阿那格雷 規(guī)格:系統適應性
PseudoVardenafil 偽伐地那非 規(guī)格:系統適應性
N-DesehylVardenafil N-去乙基伐地那非 規(guī)格:細胞培養(yǎng)級
VardenafilDihydrochlorideSal 伐地那非二鹽酸 規(guī)格:細胞培養(yǎng)級
Vardenafil-d5 伐地那非-d5 規(guī)格:細胞培養(yǎng)級,效價≥180IU/mg
Besainhydrochloride 鹽酸貝他定 規(guī)格:顯色劑,96.0%
N-DesmehylrifluoperazineDihydrochloride N-去甲基二鹽酸三氟拉嗪 規(guī)格:校準溫度計用
Disulfiram-d20 雙硫侖-d20 規(guī)格:效價:>900u/mg
DeoxycholicAcid,SodiumSal 脫氧膽酸鈉鹽 規(guī)格:效價≥1300U/MG,BR
Sodiumdeoxycholamonohydra 一水脫氧膽酸鈉 規(guī)格:效價≥750IU/MG,BP,BR
Ramiprila-d5 雷米普利拉-d5 規(guī)格:效價測定
Ramipril-d3 雷米普利-d3 規(guī)格:效價測定
Ramiprila 雷米普利拉 規(guī)格:效價測定
Mehyl4,7,8,9-ra-O-aceyl-2-hio-N-aceyl-a-D-neuraminicacidmehylesr 甲基4,7,8,9-四-O-乙酰-2-硫代-N-乙酰-a-D-神經氨酸甲酯 規(guī)格:效價測定