原理:
曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,產(chǎn)品僅用于科研Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Aspergillus spp.
貨號:CP914032
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
熒光定量PCR實驗步驟:
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒的相關產(chǎn)品:
Yellow powderChamaechromone中文名:狼毒色原酮性狀:Yellow powder純度:98.0%
PowderLiquiritin apioside中文名:芹糖甘草苷性狀:Powder純度:%
PowderPierreione B中文名:性狀:Powder純度:98.0%
PowderAfzelechin中文名:阿夫兒茶精性狀:Powder純度:98.5%
Yellow powder5-Hydroxy-7-acetoxyflavone中文名:性狀:Yellow powder純度:97.0%
PowderAmpelopsin中文名:蛇葡萄素性狀:Powder純度:98.0%
Yellow powderQuercetin中文名:槲皮素性狀:Yellow powder純度:99.0%
Powder3,4'-Dihydroxy-3',5,7-trimethoxyflavan中文名:性狀:Powder純度:%
Powder5,7-Diacetoxyflavone中文名:性狀:Powder純度:%
Yellow powderWogonin中文名:漢黃芩素性狀:Yellow powder純度:98.0%
Brown powderAmaronol A中文名:性狀:Brown powder純度:98.5%
Yellow powder5-Acetoxy-7-hydroxyflavone中文名:性狀:Yellow powder純度:%
Cryst.5,7-Diacetoxy-8-methoxyflavone中文名:性狀:Cryst.純度:%
Yellow powder5-Hydroxy-7-acetoxy-8-methoxyflavone中文名:性狀:Yellow powder純度:%
PowderNaringenin中文名:柚皮素性狀:Powder純度:98.0%
Powder3,7-Di-O-acetylpinobanksin中文名:性狀:Powder純度:96.0%
Yellow powderApigenin中文名:芹菜素性狀:Yellow powder純度:99.0%
曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒Rifamycinsodiumsalt 利福霉素鈉;利福霉素SV鈉 規(guī)格:>98%
Octreotideacetate 醋酸奧曲肽 規(guī)格:>98%
(S)-(+)-2-Ami-butanol S(+)-2-氨基-1-丁醇 規(guī)格:>98%
trans-D-erythro-sphingosine D-鞘氨醇 規(guī)格:>98%
ribophytosphingosinehydrochloride 糖脂;植物鞘胺醇 規(guī)格:>98%
Omeprazole 奧美拉唑 規(guī)格:>98%
Omeprazole 奧美拉唑(標準品) 規(guī)格:>98%
Chlorzoxazone 氯唑沙宗 規(guī)格:>98%
Chlorzoxazone 氯唑沙宗(標準品) 規(guī)格:>98%
D-Glucosaminehydrochloride D-氨基葡萄糖鹽酸鹽 規(guī)格:>98%
D-Glucosaminehydrochloride 鹽酸氨基葡萄糖(標準品) 規(guī)格:>98%
Droperidol 氟派利多,氟哌利多 規(guī)格:>98%
Droperidol 氟派利多,氟哌利多(標準品) 規(guī)格:>98%
6-Mercaptopurinemonohydrate 6-疏基嘌呤/6-巰基嘌呤(一水合物) 規(guī)格:>98%
Paracetamol(Acetaminofenpolvo) 撲熱息痛/對乙酰氨基酚 規(guī)格:>98%