產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞說明書 | 5×105 | YS-X6605 |
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細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
無菌采樣袋/均質(zhì)袋正醛 AR,97%醋酸維生素ApUNO1-hPLCG2
SCDLP 液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)聚烯 K-value 72-71 3,4-二氧基苯醇pUNO1-hPLGFa
Dey/Engley 中和肉湯基礎(chǔ)聚烯 K-value 68-65天然維生素EpUNO1-hPPBP
疊氮葡萄糖肉湯聚烯 K-value 62-60 VE油pUNO1-hPPM1Aa
Pfizer 腸球菌選擇性瓊脂(PSE 瓊脂)聚烯 K-value 59-55膽鈣骨化醇pUNO1-hPPM1Ba
培養(yǎng)基哌啶 AR,99.5%(劇)骨化醇pUNO1-hPPP3CAb
KF 鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)(KF 培養(yǎng)基基礎(chǔ))三胺 CP,98.0%長春新堿硫化物pUNO1-hPPP3CBa
吐溫-80四烯 AR,98%抗壞血酸pUNO1-hPPP3R1
革蘭氏染色液間苯胺 GR,99%肉毒堿pUNO1-hPRAT4A
3%過氧化溶液酸烯酯 99.0%鹽酸吡哆辛pUNO1-hPRAT4B
大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞說明書異硫氰酸熒光素(異構(gòu)體I) 90%Lobetyolin;黨參炔苷DL-Rat FⅡ(Coagulation Factor Ⅱ) ELISA Kit
Rat FⅧ(Coagulation Factor Ⅷ) ELISA Kit
4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧雜惡二唑 99%Irinotecan hydrochloride;鹽酸伊立替康三水酸二鉀Rat FⅩ(Coagulation Factor Ⅹ) ELISA Kit
Rat FⅩⅢ(Coagulation Factor ⅩⅢ) ELISA Kit
對酸二鈉 98%Timosaponin BⅡ;知母皂苷BⅡ酸二鋅Rat FⅫ(Coagulation Factor Ⅻ) ELISA Kit
Rat FAS/CD95(Factor Related Apoptosis) ELISA Kit
化錠 94%Vitamin B5;維生素B5脂肪酸酯鈉Rat FASL(Factor Related Apoptosis Ligand) ELISA Kit
Rat FASN(Fatty Acid Synthase) ELISA Kit
羅丹明123 99%Pemetrexed;培美曲塞酸酸二鈉Rat FDP(Fibrinogen Degradation Product) ELISA Kit
Rat FE(Ferritin) ELISA Kit
草酸二酯 AR,99%Sodium 2-(4-chlorophenoxy)acetate;4-苯氧酸鈉月桂酸Rat FGF-10(Fibroblast Growth Factor-10) ELISA Kit
Rat FGF19(Fibroblast Growth Factor 19) ELISA Kit
草酸二酯 CP,98%Diacerein;雙醋瑞因碳酸鋇Rat FGF21(Fibroblast Growth Factor 21) ELISA Kit
Rat FGF4(Fibroblast Growth Factor 4) ELISA Kit
草酸二酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.7% (GC)Lidocaine;利多卡因酸二鈉Rat FGF6(Fibroblast Growth Factor 6) ELISA Kit
Rat FGFR1(Fibroblast Growth Factor Receptor 1) ELISA Kit
烯基鈀(II)二聚物 Pd 58.2%Valsartan;纈沙坦聚烯醇Rat FIX(Coagulation Factor IX) ELISA Kit
Rat FLAP(5-Lipoxygenase Activating Protein) ELISA Kit
(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇 98%Amprolium hydrochloride;鹽酸氨啉二胺四酸Rat FMOD(Fibromodulin) ELISA Kit
Rat FRS3(Fibroblast Growth Factor Receptor SubstRate 3) ELISA Kit
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。