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名稱 | A7r5 (大鼠胸大動脈平滑肌細胞) (種屬鑒定正確) |
別稱 | A7R5 |
種屬 | 大鼠 |
年齡（性別） | 胚胎 |
組織來源 | 胸大動脈平滑肌 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
背景描述 | A7r5細胞培養(yǎng)到穩(wěn)定期后，表現(xiàn)出長高的肌激酶和肌氨酸磷酸激酶活性(CPK)；A7r5細胞分裂終止后合成骨肉型CPK。 |
生物安全等級 | 1 |
生長培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
基因表達情況 | myokinase; creatine phosphokinase (muscle isoenzyme); myosin |
保藏機構 | ATCC; CRL-1444 ECACC; 86050803 |
細胞傳代：
1. A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細胞試驗準備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇 0.8X106 個細胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉染。
細胞轉染：
1. 轉染試劑的準備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA 質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。
6號染色體開放閱讀框28封閉多肽 | 肺炎克雷伯菌PCR檢測試劑盒 |
非洲馬瘟病毒RT-PCR試劑盒 | 干擾suα/β受體2ELISA試劑盒 |
人彈性蛋白mei(Elastase) ELISA檢測試劑盒 | 鈣調寧蛋白1ELISA試劑盒 |
人11β羥類固醇脫氫mei1型(11β-HSD1)ELISA試劑盒 | 剪切修復交叉互補修復缺陷偶聯(lián)因子1ELISA試劑盒 |
人套膜蛋白(iNV)試劑盒ELISA | 鈣黏蛋白12ELISA試劑盒 |
人CD73分子(CD73)檢測試劑盒elisa | 中心粒外周物質1ELISA試劑盒 |
NOC2家族樣蛋白封閉多肽 | 生孢梭菌PCR試劑盒 |
染色體結構維持蛋白4封閉多肽 | 馬腺病毒PCR試劑盒 |
E3泛su蛋白連接meiHECW2封閉多肽 | 偽結核棒桿菌PCR試劑盒 |
粘蛋白/巖藻糖基轉移mei3封閉多肽 | 豬流感(SIV)核suan檢測試劑盒 |
ECO1蛋白封閉多肽 | 氣單胞菌通用PCR試劑盒 |
CD84封閉多肽 | A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細胞貓科研PCR檢測試劑盒 |
SLFN13蛋白封閉多肽 | 曼氏桿菌通用PCR試劑盒PCR試劑盒 |
蛋白激meiC亞性D型封閉多肽 | 普通變形桿菌PCR試劑盒 |
1號染色體開放閱讀框174封閉多肽 | 普雷沃菌屬通用PCR檢測試劑盒 |
細胞培養(yǎng)實驗基本操作：
①進無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內的培養(yǎng)液成分如蛋白質等燒焦后會產(chǎn)生有害物質，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。
