產(chǎn)品名稱 | A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞 | 貨號 | A01X1119 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | A7r5:A7r5 |
分類 | 大鼠系 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
商品介紹：
別稱 | A7R5 |
種屬 | 大鼠 |
年齡（性別） | 胚胎 |
組織來源 | 胸大動脈平滑肌 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
詳情簡介 | A7r5細(xì)胞培養(yǎng)到穩(wěn)定期后，表現(xiàn)出長高的肌激酶和肌磷酸激酶活性(CPK)；A7r5細(xì)胞分裂終止后合成骨肉型CPK。 |
生物安全等級 | 1 |
生長培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養(yǎng)條件 | |
氣相 | 空氣，95%；CO2，5% |
溫度 | 37℃ |
基因表達(dá)情況 | myokinase; creatine phosphokinase (muscle isoenzyme); myosin |
別稱公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項：
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時候，這時細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護(hù)劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Rho家族GTP酶3抗體 英文名；RND3結(jié)蛋白抗體
Rho結(jié)合蛋白2抗體 英文名；Rhophilin 2結(jié)蛋白樣蛋白CGNL1抗體
Rho鳥甘酸轉(zhuǎn)運蛋白抗體 英文名；ARHGEF11結(jié)蛋白重組兔單克隆抗體
Rho鳥苷酸交換因子2抗體 英文名；GEF H1結(jié)締組織生長因子抗體
Rho鳥苷酸交換因子2重組兔單克隆抗體 英文名；GEF H1結(jié)構(gòu)蛋白家族1抗體
Rho相關(guān)蛋白激酶1/2抗體 英文名；ROCK1 + ROCK2結(jié)構(gòu)蛋白家族2抗體
Rho相關(guān)蛋白激酶1抗體 英文名；ROCK1結(jié)構(gòu)蛋白家族3抗體
Rho相關(guān)蛋白激酶2單克隆抗體 英文名；ROCK2結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1抗體
Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體 英文名；ROCK2結(jié)合球蛋白β抗體
Rho相關(guān)結(jié)構(gòu)域BTB蛋白質(zhì)1抗體 英文名；RHOBTB1結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗體
A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞RH家族B型糖蛋白RHBG抗體 英文名；RHBG結(jié)合珠蛋白家族3A1抗體
Rh血型C抗原抗體 英文名；RHCE結(jié)合珠蛋白相關(guān)蛋白抗體
RH血型C糖蛋白抗體 英文名；RHCG結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體
RIT1蛋白抗體 英文名；RIT1結(jié)核分枝桿菌Ag85B抗體
RMND5B蛋白抗體 英文名；RMND5B結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白ESAT6抗體
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)
A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達(dá)效率。
