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名稱 | 9L/lacZ (大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞) (種屬鑒定正確) |
別稱 | 9L/LacZ |
種屬 | 大鼠 |
年齡（性別） | 雄性 |
組織來(lái)源 | 腦，膠質(zhì)細(xì)胞 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
背景描述 | The cells constitutively express the lacZ reporter gene product, E. coli derived beta-gal, as revealed on tissue sections by histochemical stain, and single tumor cells can be identified.Lymphocytes and other responding cells can be identified by double labeling with antibodies on the same slide.The contrast between stained cells and background facilitates image analysis.The beta-gal expression is very stable, but cells may need to be re-cloned after months of growth in culture. |
生物安全等級(jí) | 1 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | DMEM＋10%FBS＋1%P/S |
推薦傳代比例 | 1:4-1:8 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
致瘤性 | Yes, forms tumors in the brains of CD Fischer 344 rats |
基因表達(dá)情況 | beta galactosidase (beta-gal) |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2200 |
細(xì)胞傳代：
1. 9L/lacZ大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來(lái)為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開(kāi)。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
凋亡抑制蛋白封閉多肽 | 產(chǎn)氣克雷伯氏菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷 |
擠奶工結(jié)節(jié)病毒PCR試劑盒 | 干擾sua-抗體ELISA試劑盒 |
人彈性蛋白(ELN)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 鈣調(diào)蛋白樣蛋白5ELISA試劑盒 |
人11-脫氧檢測(cè)試劑盒elisa | 真核翻譯起始因子6ELISA試劑盒 |
人彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒 | 鈣黏蛋白10ELISA試劑盒 |
人CD82分子(CD82)試劑盒ELISA | 中心體BRCA2相互作用蛋白ELISA試劑盒 |
硫氧還蛋白相關(guān)跨膜蛋白3封閉多肽 | 鯉皰疹病毒2型PCR試劑盒 |
CD84封閉多肽 | 馬腺疫鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
E3泛su蛋白連接meiHACE1封閉多肽 | 牛棒桿菌PCR試劑盒 |
粘蛋白12封閉多肽 | 腦心肌炎病毒(EMCV)核suan檢測(cè)試劑盒 |
ECM29蛋白封閉多肽 | 氣單胞菌通用PCR檢測(cè)試劑盒 |
磷suan化整合suβ2/Integrin β2封閉多肽 | 9L/lacZ大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞貓免疫缺陷病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
萊克多巴胺牛血清白蛋白偶聯(lián)物 | 蔓荊子探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 |
緊密連接蛋白3封閉多肽 | 普氏立克次氏體PCR試劑盒 |
銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白9封閉多肽 | 葡萄狀穗霉屬通用PCR試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無(wú)菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開(kāi)始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開(kāi)或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過(guò)的器械要冷卻后才能使用；已吸過(guò)培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過(guò)火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過(guò)早開(kāi)瓶，開(kāi)瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過(guò)早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來(lái)自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來(lái)的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
