實驗操作步驟：
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。
b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
公司向您推薦PrimaCell™小鼠肝實質細胞試劑盒說明書的詳細說明：
產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™小鼠肝實質細胞試劑盒說明書 |
規(guī)格 | 6次/盒 |
貨號 | YS-X6764 |
細胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長特性，在適當?shù)臅r候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
?
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
細胞甘油二脂酰激酶（DAG KINASE）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
寡核苷酸探針同位素法DNA斑點雜交*試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次
動物源性食品狗源基因檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
細胞肌酸激酶同工酶混合型（CK-MB）活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
石蠟切片組織RUNX3蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
植物源性飼料處理試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
組織肌酸激酶同工酶肌肉型（CK-MM）活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
細胞βAMYLOID蛋白表達比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次
胰蛋白酶（0.25%）四乙酸混合 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：100毫升
體尿激酶（UROKINASE）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
細胞CYP2B1蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次
轉基因油菜（canola）RF3品系基因檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
PrimaCell™小鼠肝實質細胞試劑盒說明書3-溴-2-氯吡分子式：192.44英文名稱：3- -2- chloride號：52200-48-3分子量： C5H3BrClN
康樂安分子式：129.54英文名稱：Kang Lean號：4214-79-3分子量： C5H4ClNO
7-溴喹啉分子式：208.05英文名稱：7- bromide號：4965-36-0分子量： C9H6BrN
2-氯-3-吡分子式：138.55英文名稱：2- chloro -3- cyanopyridine號：6602-54-6分子量： C6H3ClN2
3-溴-5-甲-4-吡甲醛分子式：200.03英文名稱：3- -5- methyl -4- pyridine formaldehyde號：203569-15-7分子量： C7H6BrNO
馬來酰(青鮮素)分子式：112.09英文名稱：Maleic hydrazide (MH)號：123-33-1分子量： C4H4N2O2
對甲乙英文名稱：The methyl ethyl benzene分子式：120.19分子量： C9H12號：25550-14-5
4-去甲表鬼臼毒素英文名稱：4- - demethylepipodophyllotoxin分子式：400.3787分子量：C21H20O8號：6559-91-7
靛質試劑英文名稱：Indole reagent分子式：分子量：號：
二安替比林英文名稱：Two diantipyryl methane分子式：388.47分子量： C23H24N4O2·H2O； CH號：1251-85-0
甲分子式：46.07英文名稱：Methyl hydrazine號：60-34-4分子量： CH6N2
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
