測定步驟:
1、 酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
100管/48樣 | 微量法 | GOY-01S6747 |
商品介紹
測定意義 α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解,主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL對于植物種子的萌發(fā)至關重要,種子萌發(fā)初期,其催化產(chǎn)生的D-半乳糖通過糖酵解途徑迅速轉化和消耗,為種子的萌發(fā)提供最初的能量來源,后期則主要參與細胞壁儲藏多糖水解。 測定原理: α-GAL分解對-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算α-GAL活性。 自備用品: 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
② 細菌/細胞樣本:
先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通??梢允箿y定正常。
Anti-phospho-c-Raf (Ser289) /FITC 熒光素標記化原癌基因c-Raf抗體IgG
Anti-phospho-c-Raf (Ser259)/FITC 熒光素標記化原癌基因c-Raf抗體IgG
Anti-phospho-c-Raf (Ser296) /FITC 熒光素標記化原癌基因c-Raf抗體IgG
Anti-phospho-c-Raf (Ser338) /FITC 熒光素標記化原癌基因c-Raf抗體IgG
Anti-phospho C-Myc(pThr58/pSer62)/FITC 熒光素標記抗化致癌基因C-Myc抗體IgG
Anti-phospho C-Met/pHGFR(pTyr1365)/FITC 熒光素標記抗化原癌基因c-Met抗體IgG
Anti-phospho-c-Jun/AP-1(pThr91/pThr93)/FITC 熒光素標記抗化原癌基因c-Jun抗體IgG
Anti-phospho-c-Jun (Ser243) /FITC 熒光素標記化原癌基因c-Jun抗體IgG
α半乳糖苷酶(αGAL)微量法檢測試劑盒晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)免疫試劑盒進口、分裝
小鼠白介素18(IL-18)免疫試劑盒進口、分裝
豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)免疫試劑盒進口、組裝
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大腸癌專一抗原4(CCSA-4)免疫試劑盒進口、組裝
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大鼠Ⅵ型膠原(Col Ⅵ)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
豬神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應