試劑配制
1、酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
服務(wù)：
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要，比如在檢測(cè)范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求，而量身定制檢測(cè)試劑盒，有效控制檢測(cè)試劑成本。并可提供免費(fèi)代測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 人胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 | Human cytosolic phospholipase A2 (cPLA2) ELISA Kit |
貨號(hào) | YS-H11059 |
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
膜型絲氨酸蛋白酶2抗體 規(guī)格： 0.2ml 英文名稱：TMPRSS4
磷酸化酪氨酸激酶A抗體 規(guī)格： 0.1ml 英文名稱：Phospho-TrkA (Tyr785)+TrkB (Tyr816)
跨膜蛋白166抗體 規(guī)格： 0.2ml 英文名稱：TMEM166
核轉(zhuǎn)錄因子25抗體 規(guī)格： 0.2ml 英文名稱：Transcription factor 25
磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格： 0.1ml 英文名稱：phospho-Tau protein(Ser214)
促甲狀素受體抗體 規(guī)格： 0.1ml 英文名稱：TSHR
尿調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格： 0.1ml 英文名稱：Uromucoid
泛素載體蛋白L6抗體 規(guī)格： 0.2ml 英文名稱：Ube2L6
VWCE抗體 規(guī)格： 0.2ml 英文名稱：VWCE
極低密度脂蛋白受體抗體 規(guī)格： 0.1ml 英文名稱：VLDL Receptor
Wolfram綜合征蛋白1抗體 規(guī)格： 0.2ml 英文名稱：WFS1
斑聯(lián)蛋白抗體 規(guī)格： 0.2ml 英文名稱：Zyxin
鋅指蛋白297抗體 規(guī)格： 0.2ml 英文名稱：ZBTB22
信號(hào)誘導(dǎo)增殖相關(guān)蛋白1樣蛋白2抗體 規(guī)格： 0.2ml 英文名稱：SIPA1L2
人胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA檢測(cè)試劑盒1g 洋紅 Carmine 室溫干燥避光保存
100g 酸水解酪素 Casein Acid Hydrolysate 室溫干燥保存
100g 酶水解酪素 Casein Enzymatic Hydrolysate 室溫干燥保存
1g 過(guò)氧化氫酶 (牛肝) Catalase From Bovine Liver -20℃保存
5g 噻孢霉素 Cefotaxime Sodium Salt 4℃保存
5g 纖維二糖 D-(+)-Cellobiose 室溫保存
1g 纖維素酶 Cellulase From Aspergillus Niger 4℃保存
100g 纖維素 DE-52 Cellulose，DE-52 室溫干燥保存
25mg 先鋒霉素 Cephalothin Sodium Salt 4℃避光保存
10g 銫 Cesium Chloride(CsCl) 室溫干燥保存
25g 十六烷基三溴化銨 CTAB(Cetyltrimethylammonium Bromide) 室溫干燥保存
1g CHAPS CHAPS 室溫保存
5g 2-( 環(huán)己胺基 ) 乙烷磺酸 CHES(2-(Cyclohexylamino)ethanesulfonic Acid ) 室溫干燥保存
操作步驟：
1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
