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一、流動相的要求
     液相色譜是樣品的組分在柱填料和流動相之間質(zhì)量交換來達(dá)到分離的要求，所以實(shí)驗(yàn)室要求流動相需要舉報(bào)下面幾個特點(diǎn)。

1、純度
  
  流動相需要按照規(guī)定使用HOLC的試劑。使用的時(shí)候過濾去除里面的顆粒性雜質(zhì)或者一些別的物質(zhì)。如果溶劑里面雜質(zhì)過多，會導(dǎo)致色譜柱的壽命降低。


2、溶解度 
   
    樣品的溶解度需要合適，不能過大或者過小。如果溶解的樣品不好會導(dǎo)致柱頭沉淀，不光是影響分離還會導(dǎo)致色譜柱使用壽命降低。


3、粘度

粘度要低(應(yīng)<2cp) ，高粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴(kuò)散、傳質(zhì)，降低柱效，還會使柱壓降增加，使分離時(shí)間延長。******選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動相。

4、樣品易于回收。應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。

5、流動相PH 

采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時(shí)，通過調(diào)節(jié)流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時(shí)，弱酸主要以分子形式存在;對弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時(shí)，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時(shí)，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。 

二、色譜泵的使用與維護(hù)

為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩(wěn)定性，必須按照下列注意事項(xiàng)進(jìn)行操作：  

1 防止任何固體微粒進(jìn)入泵體，因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動相中的任何固體微粒。流動相******在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜(0.2μm或0.45μm)等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒(或片)。的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。  

2 泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，***終產(chǎn)生漏液。    

3 的工作壓力決不要超過規(guī)定的******壓力，否則會使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。

三、色譜柱的使用與維護(hù)

在日常分離分析工作中，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。 

1 柱子在裝卸、更換時(shí)，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動，以免柱床產(chǎn)生空隙。

2 如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。 

3 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。 

4 應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?nbsp;

5 如使用柱溫控制裝置時(shí)，應(yīng)注意在通人流動相后才能升溫。

6 一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。 

7 選擇使用適宜的流動相，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。 

8 避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。 

9 經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。 

10 保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。******禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時(shí)間。 

11 色譜柱在使用的時(shí)候，如果壓力突然增高，可能是燒結(jié)濾片堵塞，這個時(shí)候應(yīng)該考慮清洗濾片或者更換濾片。還有一種可能***是大分子進(jìn)入了色譜柱里面，。導(dǎo)致色譜柱柱頭污染。如果柱效降低或者色譜峰變形，那么可能回事柱頭塌陷或者死體積過大。  

12 在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機(jī)，需及時(shí)對色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。