解析生物樣品的處理******技術(shù)（方法）

       生物樣品通常情況都是是指植物的花、葉、莖、根、種子等，動物(包括人)的體液(如：尿、血、***是口水以及一些液體)、汗毛還有一些器官。欲分析的組分常有植物體內(nèi)的微量元素、營養(yǎng)成分、農(nóng)藥殘留等等；平常動物里面的一些元素、藥物及代謝產(chǎn)物、一些關(guān)于這個的有關(guān)于這個的化合物、、由于生物樣品及某些欲測組分的特殊性，生物樣品的處理，除可使用上述的樣品處理常用技術(shù)外，在采樣、欲測組分的分離提取方面需采用一些特殊技術(shù)，成都摩爾科學(xué)儀器有限公司現(xiàn)對這些特殊技術(shù)作些簡要介紹。

采    樣

生物樣品一般采自動、植物活體，采樣方法與其他樣品有所不同，一般采用注射器吸取，、剪切割等方法采集。采樣時要注意采樣時機(jī)，因為生物活體總在新陳代謝；采樣后對采集的樣品要立即加以處理，因為生物樣品一般都有生物活性，如不立即加以處理，欲測組分***可能發(fā)生變化。如采集血樣后要立即加抗血凝劑；采集好某些器官組織后要立即加一些防腐劑，或立即進(jìn)行速凍或脫水處理。生物樣品的采集******在無菌條件下進(jìn)行。

細(xì)胞的破碎

當(dāng)生物樣品中的欲測組分（主要是各種多肽激素、各種酶以及各種基因工程的產(chǎn)物如干擾素、胰島素、生長激素等等）存在于生物體細(xì)胞內(nèi)及多細(xì)胞生物組織中時，需在分析測定它們之前將細(xì)胞和組織破碎，使這些欲測組分充分釋放到溶液中去。不同的生物體，或同一生物體的不同組織，其細(xì)胞破碎的難易程度不一樣，使用的方法也不******相同。如動物胰臟、肝臟、腦組織一般比較柔軟，用普通的勻漿器研磨即可，肌肉及心臟組織較韌，需預(yù)先鉸碎再作成勻漿。植物肉組織可用一般研磨方法，含纖維較多組織則必須在搗碎器內(nèi)破碎或加砂研磨。許多微生物均具有堅韌的細(xì)胞壁，常用自溶、冷熱交替、加砂研磨、超聲波和加壓處理等方法?？傊?，破碎細(xì)胞的目的***是為了破壞細(xì)胞的外殼，使細(xì)胞內(nèi)含物有效地釋放出來，獲得有效的提取。

在用儀器分析生物樣品中的一些小分子化合物及一些多肽類化合物時，蛋白質(zhì)的存在，常常嚴(yán)重干擾分析，需要在制備儀器分析樣品時將這些蛋白質(zhì)除去，常用的除蛋白質(zhì)方法有以下一些：（成都摩爾科學(xué)儀器有限公司）

1.   加熱

當(dāng)欲測組分熱穩(wěn)定性好時，可采用加熱的方法將一些熱變性蛋白沉淀。加熱溫度視欲測組分的熱穩(wěn)定性而定，通?？杉訜岬?span>90℃。蛋白沉淀后可用離心或過濾除去，這種方法***簡單，但只能除去熱變性蛋白。

鹽析

利用不同蛋白質(zhì)在高濃度的鹽溶液中，溶解度不同程度的降低來沉淀除去蛋白質(zhì)。在低鹽濃度下蛋白質(zhì)溶解度隨著鹽濃度升高而增加，稱為鹽溶作用。當(dāng)鹽濃度不斷升高時，不同蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降，并先后析出沉淀，稱為鹽析作用。鹽析法的優(yōu)點(diǎn)是對設(shè)備和條件要求低，安全，應(yīng)用范圍廣泛，一般可在室溫下操作。常用的中性鹽有硫酸銨、、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。硫酸銨的鹽析能力強(qiáng)，飽和液濃度大，溶解度受溫度影響小，一般不會使蛋白質(zhì)變性。缺點(diǎn)是緩沖能力差，pH值常在4.5～5.5間。

3.有機(jī)溶劑沉淀

蛋白質(zhì)的沉淀與溶解，與溶劑的介電常數(shù)有關(guān)。降低溶液的介電常數(shù)，能增加蛋白質(zhì)分子上不同電荷的引力，使其溶解度變小，同時還破壞蛋白質(zhì)的水化膜而使蛋白質(zhì)沉淀析出。乙醇和丙酮是***常用的有機(jī)溶劑，丙酮的介電常數(shù)小于乙醇，故沉淀的能力較強(qiáng)

4.等電點(diǎn)沉淀

       利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時溶解度******，用酸、堿調(diào)pH，可使蛋白沉淀析出，但這時沉淀不******，可與有機(jī)溶劑沉淀法、鹽析法聯(lián)合使用。

5.膜分離

       膜分離技術(shù)包括超濾、反滲透析、電滲析、微孔過濾、氣體滲析和超精密過濾等。利用膜分離技術(shù)可將欲測小分子化合物和大分子的蛋白質(zhì)很好分離。

 6.凝膠層析

       利用分子大小不同的物質(zhì)在流過凝膠固定相時的保留時間不同，大分子首先流出，小分子***后流出，可將欲測小分子化合物與大分子蛋白質(zhì)分離。這時欲測小分子化合物的濃度被流動相所稀釋，必要時還要進(jìn)行濃縮。

7.柱層析

        用能吸附蛋白質(zhì)的材料裝填成小柱，使欲除蛋白質(zhì)的樣品流過小柱，樣品中的蛋白質(zhì)被柱填料吸附，欲測組份不被吸附，從小柱中流出。

8.高速離心

      高速離心是根據(jù)物質(zhì)沉降系數(shù)、質(zhì)量、浮力因子等不同，應(yīng)用強(qiáng)大的離心力使物質(zhì)分離、濃縮、提純的方法，是生物樣品制備中常用的分離方法之一。由于蛋白質(zhì)等生物大分子，分子量大，在高速離心時將首先沉淀在離心管底部，不同分子量的蛋白質(zhì)等生物大分子沉降速度不同，也可按分子量大小沉降在離心管的不同位置，這樣***可以從離心管的不同位置取出樣品進(jìn)行分析。

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