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HPLC日常保養(yǎng)與問題解決

來源:北京瞬微科技發(fā)展有限責(zé)任公司   2025年03月07日 07:21  

液相色譜一般是由、檢測器、手動進樣器或自動進樣器、柱溫箱、色譜柱等單元組成,是分離化合物的儀器。其比較精密,在使用中難免出現(xiàn)各種各樣的故障,有些故障是由于所選方法不合適引起的, 有些故障是由于日常維護保養(yǎng)不足引起的,這里對可能出現(xiàn)的問題概括總結(jié),供大家參考。

1. 壓力不穩(wěn)

(1)流路中有氣泡:流路中產(chǎn)生氣泡的原因是由于流動相超聲不充分, 配制的流動相沒有恢復(fù)到室溫和過濾頭堵塞引起的。流路中有氣泡時用0.45um的過濾膜過濾且充分的超聲, 特別是用乙腈和水混合的流動相更需充分的超聲,當(dāng)使用兩種以上的試劑配制的流動相時,一定要等到流動相恢復(fù)到室溫才可。

(2)單向閥堵塞:單向閥是最容易產(chǎn)生故障的部件, 由于經(jīng)常使用含酸、 堿和鹽的流動相, 如果置換流動相的順序和沖洗方法不當(dāng)很容易造成單向閥堵塞而引起壓力不穩(wěn)。當(dāng)單向閥出現(xiàn)堵塞時就要根據(jù)流動相的成份是否含有鹽而采取不同的處理方法。如果流動相中沒有鹽就用異丙醇沖洗,邊沖洗邊觀察壓力一直沖洗到壓力穩(wěn)定。如果流動相含有鹽, 一定要先用水沖洗,然后再用異丙醇沖洗。如果沖洗后壓力還是不穩(wěn)就需把單向閥卸下來進行超聲。

(3)密封墊磨損:密封墊在壓力作用下長時間與柱塞桿磨擦很容易磨損。解決:密封墊是消耗品不能修復(fù),只能更換。

2. 結(jié)果準(zhǔn)確性差

(1)手動進樣器:手動進樣器的定量分為進樣針定量和定量環(huán)定量。手動進樣器引起偏差大的主要原因是進樣口漏液、定量環(huán)堵、轉(zhuǎn)子密封磨損等3個方面。

如果進樣時感覺很費力且廢液管有時不出液體,這可能是定量環(huán)、轉(zhuǎn)子密封、廢液管堵造成的。這時可分別先拆下5口的廢液管或定量環(huán),如果進樣正常則是廢液和定量環(huán)堵, 廢液管堵時可把廢液管進行加熱處理。定量環(huán)堵時可把定量環(huán)連接到上分別用水和異丙醇沖洗, 必要時可對定量環(huán)加熱處理。如果拆下5口的廢液管或定量環(huán),后進樣依舊不正常,就可能是轉(zhuǎn)子密封磨損,轉(zhuǎn)子密封是消耗品如果轉(zhuǎn)子密封磨損只有更換。

(2)自動進樣器:分別由進樣針、高壓閥、低壓閥、計量泵和控制系統(tǒng)組成。自動進樣器引起偏差大的主要原因是管路有氣泡、計量泵吸樣不準(zhǔn)、進樣口漏液、高低壓閥轉(zhuǎn)子密封磨等原因引起的。

由管路有氣泡:先排氣或用異丙醇沖洗, 然后用1個樣品瓶裝滿水且稱重,把進樣量設(shè)定為50uL或100uL單次進樣。每進一針稱量一次重量是否減少了50ug或100ug, 連續(xù)進5針,計算每一針的誤差有多大, 如果每一針的誤差都很大且沒有規(guī)律, 則是考慮進樣針堵、量泵密封圈磨損、或高低壓閥轉(zhuǎn)子密封磨損等原因所致。

進樣口漏液:進樣口漏液是由于進樣針彎曲,針密封磨損,進樣針位置錯誤造成的。進樣針彎曲只要不是直角彎或彎曲度不大,只需把進樣針卸下來慢慢平直后再裝上,然后進行針校正就可以了。如果是針密封磨損引起的進樣口漏液只有對其更換。如果進樣針位置錯誤,只許要對針位置進行校準(zhǔn)即可。

(3)高低壓切換閥: 高低壓切換閥是自動進樣器切換最頻繁的部件, 也是最容易出現(xiàn)故障的部件。其引起偏差大的主要原因是由于轉(zhuǎn)子密封堵或磨損引起的,可卸下轉(zhuǎn)子密封,如果很臟就用異丙醇超聲, 如果磨損就需要更換。

(4)計量泵:當(dāng)螺桿油膩過多阻礙螺桿運行或密封墊磨損時都能引起吸樣量不準(zhǔn), 從而導(dǎo)致重現(xiàn)性誤差大??砂崖輻U拆下清洗或上潤滑油,同時對磨損的密封墊進行更換。

3. 保留時間變化

保留時間的變化分為: 波動、 前移和后移。

(1)波動:液相色譜是一套高靈敏的儀器, 溫度對它影響很大。儀器不能放置在空調(diào)風(fēng)能直接吹到的地方。同時要盡量遠離門口。柱溫箱的溫度設(shè)定要高于室溫5℃以上。流動相使用時要恢復(fù)到室溫, 同時要充分的平衡儀器。

(2)前移:引起保留時間前移的原因主要是流速、溫度和混合流動相的比例發(fā)生變化。重點檢查水相泵的壓力和測量流速。如果是溫度引起的保留時間前移, 應(yīng)控制室溫或降低柱溫箱溫度, 如果是水相減少引起的就用水和異丙醇沖洗系統(tǒng), 超聲單向閥或更換密封墊。

(3)后移:保留時間后移主要是流速減少, 溫度降低和流動相比例發(fā)生變化引起的。應(yīng)檢查溫度是否發(fā)生變化, 測量總的流速是否減少, 然后再測量有機相泵的流速。

4. 峰形異常

(1)峰拖尾:出現(xiàn)這種情況多數(shù)都是由于色譜柱過載引起的,先檢查進樣量是否過大或樣品濃度是否過高,適當(dāng)減少進樣體積和稀釋樣品濃度把峰高控制在100mAU左右,當(dāng)出現(xiàn)前延峰時應(yīng)升高柱溫來提高流動相的傳質(zhì)速率。

(2)鬼峰:出現(xiàn)鬼峰的原因主要是流路污染、 流動相的純度不夠、 色譜柱有殘留、 溶劑效應(yīng)、 或平衡時間較短等原因引起的。重新配制流動相, 用新的流動相平衡儀器或用能溶解樣品的試劑沖洗液相系統(tǒng),問題嚴(yán)重時更換色譜柱。

(3)肩峰和分叉峰:肩峰主要是進樣量過大和樣品濃度過高引起的。所以當(dāng)出現(xiàn)肩峰時,應(yīng)減少進樣量或稀釋樣品,降低樣品的濃度。當(dāng)出現(xiàn)分叉峰時應(yīng)先去掉保護柱再進樣,如果問題依舊存在,可能是色譜柱被強保留物質(zhì)污染,應(yīng)用適當(dāng)方法沖洗色譜柱或更換色譜柱。

5. 基線噪聲大

基線噪聲大是由于流動相中有雜質(zhì)或有氣泡、檢測池污染、 氘燈使用時間過長、 光路污染、 電壓不穩(wěn)和儀器接地線不好等原因引起的。檢測池污染用異丙醇沖, 洗必要時可卸下檢測池的透鏡用異丙醇超聲。氘燈使用時間過長時應(yīng)更換新的氘燈, 更換新燈后如果能量值很低應(yīng)調(diào)整光路。如果電壓不穩(wěn)應(yīng)安裝穩(wěn)壓器。儀器要有可靠接地,且零與地線壓差不能大于0.5V。


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