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大鼠高香草酸elisa試劑盒操作步驟:
1. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。
2. 分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設標準 品組(6 個濃度)、空白孔、待測樣品組。 注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。
3. 加樣:依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水;其余微孔中加入 50ul 的待測樣本。
4. 加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液(空白對照孔除外)。
5. 溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標板 5 次,用吸水紙*拍干。 7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止:25-37℃下避光反應 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。
9. 讀板:在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。 注:讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時間控制在終止反應后的 30 分鐘內(nèi),以免影響準確性。
數(shù)據(jù)計算
1. 繪制標準曲線:各標準品 OD 值減去底色即減去空白孔 OD 值,以 6 個標準 品的 OD 值為縱坐標 y,以標準品的濃度為橫坐標 x,繪制曲線圖,如圖示, 并計算出回歸方程 y=ax+b。
2. 將待測樣品的 OD 值代入方程式,計算各組樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即 為樣品的實際 ABP 濃度。
3. 敏感度:1.0 pg/ml
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