1、 標準品
(1) 從試劑盒中取出一支標準品,于6000-10000rpm 離心30 秒。用1ml 樣本稀釋液溶解,并用吸頭對準凍存管底部反復吸打5 次以助溶解,充分混勻得到標準品S7,放置備用。
(2) 取7 個1.5 ml 離心管(S0-S6)依次排列,各加入250μl 樣本稀釋液。吸取250μl 標準品S7 到*個離心管中(S6),輕輕吹打混勻。從S6 中吸取250μl 到第二個EP 管中(S5),輕輕吹打混勻。以此類推進行標準品的倍比稀釋。S0 為樣本稀釋液。
2、 洗液工作液濃洗滌液按1:25倍用去離子水進行稀釋。例如用量筒量取240ml去離子水,倒入燒杯或其他潔凈容器中,再量取10ml濃洗滌液,均勻加入,攪拌混勻,在臨用前配妥。濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3、 生wu素標記抗體工作液生wu素標記抗體液按1:100倍用生wu素標記抗體稀釋液進行稀釋。如10μl生wu素標記抗體加990μl生wu素標記抗體稀釋液,輕輕混勻,在臨用10分鐘內配妥。
4、 辣根過氧化物酶標記親和素工作液辣根過氧化物酶標記親和素按1:100倍用辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液進行稀釋。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液,輕輕混勻,在臨用10分鐘內配妥。
操作注意事項:
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
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