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RNA直接法提取具體操作過(guò)程

來(lái)源:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司   2024年09月09日 11:45  

1)加入1ml Trizol試劑,混勻,冰上孵育10min。

2)4℃,12000rpm離心10min,小心轉(zhuǎn)移上清液到不含顆粒的新EP管中。

3)加入200ul氯仿,劇烈振蕩15秒,室溫孵育5min。

4)4℃,12000rpm離心15min?;旌弦悍秩龑?,包括最下面的C6H5OH - 氯仿有機(jī)相,中間相和上層水相。小心轉(zhuǎn)移上層水相到新的EP管(大約60%體積的Trizol),不要吸取中間相,可留下少量上層液體!(Note:質(zhì)量比數(shù)量更重要?。?/span>

5)加入等體積的異丙醇,輕輕地顛倒混勻約10次,室溫放置10min。

6)4℃,12000rpm離心10min。棄上清,1ml 75%乙醇洗滌RNA沉淀兩次。

7)4℃,12000rpm離心5min,棄上清,室溫下風(fēng)干5-10min(不要太干,過(guò)度干燥會(huì)導(dǎo)致RNA難溶解?。?。將RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。

8)立即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng),或先-80℃長(zhǎng)期保存。


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