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熒光定量PCR儀選擇關(guān)注要素:
1、 儀器的檢測通量
在購買定量PCR儀的時候要根據(jù)實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個多到384個。如果進行一般的基因表達研究或病原體檢測,實在不必購買昂貴的儀器,96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點和疾病標記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經(jīng)費有限無法購買384孔板儀器的實驗室,可以考慮購買運行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器,你會發(fā)現(xiàn)樣品的制備和小體系、多樣本的PCR體系構(gòu)建成為限制實驗速度和結(jié)果的頸瓶。
2、 硬件設(shè)計特點
熒光定量PCR儀主要有傳統(tǒng)的96孔板式、創(chuàng)新的離心式等,每種設(shè)計都有它的獨到之處但也都有無法避免的缺憾。
傳統(tǒng)的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大,而且無需特殊的耗材。有些傳統(tǒng)的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發(fā)、CCD檢測,這些光學(xué)結(jié)構(gòu)在96孔板的頂部,每個樣品孔距光源和檢測器的光程各不相同——邊緣效應(yīng),對結(jié)果產(chǎn)生影響。為了保證精確、準確的實驗結(jié)果,這類儀器在實驗過程中通常會使用ROX(一種熒光染料)或?qū)S玫腞eference dye作為參照校正實驗結(jié)果。鹵鎢燈的使用壽命短、更換成本較高已經(jīng)成為很多用戶頭痛的問題。在實驗過程中鹵鎢燈作為一種熱光源,產(chǎn)生較多熱能對實驗結(jié)果有一定的影響。CCD蕞大的優(yōu)點就是可以同時掃描所有樣品中的熒光信號,但是靈敏度較低,而且同時檢測樣品間的熒光信號存在干擾。
3、 運行速度
在熒光定量PCR儀的眾多技術(shù)參數(shù)中,升降溫速度也是廠家喜歡大力宣傳的指標。更快的升降溫,可以縮短反應(yīng)進行的時間,而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時間,提高PCR的特異性。
4、 靈活性
大規(guī)模繁忙的實驗室設(shè)備固然讓人羨慕,但是常規(guī)實驗室同樣可以有精彩的選擇。現(xiàn)在的儀器供應(yīng)商擁有眾多技術(shù)專家,有的還能提供整個分子生物學(xué)的基礎(chǔ)研究平臺,不但了解、滿足您現(xiàn)在的需求,而且還考慮到了你可能變化的需求——升級和更換模塊。
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