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外源性RNA酶可以通過下述途徑污染RNA制品:
1、玻璃制品、塑料制品和電泳槽 滅菌的一次性使用的塑料制品基本上無RNA酶,可以不經(jīng)預(yù)處理直接用于制備和貯存RNA。實驗室用的普通玻璃器皿和塑料制品經(jīng)常有RNA酶法染,使用前必須于180 ℃干烤8小時或更長時間(玻璃器皿)或用氯仿沖洗(塑料制品)。另一種方法是用0.1 %焦碳酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡用于制備RNA的燒杯,試管和其他用品。DEPC是RNA酶的強烈抑制劑,但其作用并不是絕對的(Fedorcsak和Ehrenberg,1966)。灌滿DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小時,然后用滅菌水淋洗數(shù)次, 并于100℃干烤15分鐘(Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高壓蒸氯滅菌15分鐘。上述處理可以除去器甲上痕量的DEPC,以防DEPC通過羧甲基化作用對RNA的嘌呤堿基進行修飾。
羧甲基化的RNA在無細(xì)胞體系中翻譯效率很低,然而,除非其中大部分嘌呤堿基均被修飾,否則其形成DNA:RNA或RNA:RNA雜交休的能力并不明顯降低。用于RNA電泳的電泳槽應(yīng)用去污劑洗干凈,再用水沖洗,用乙醇干燥,然后灌滿3%的H2O2溶液,于室溫放置10分鐘,然后用0.1 %DEPC處理過的水徹di沖洗電泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和電泳槽作上特殊標(biāo)記,存放在zhi定地點,為RNA實驗專用。
2、研究人員造成的污染 RNA酶最主要的潛在污染源是研究人員的手。因此,在準(zhǔn)備分離的和分析RNA的材料和溶液時,主有涉及RNA的一切操作過程中,都應(yīng)戴一次性手套,接觸“胖的”玻璃器皿和其他物品以后,手套就可能沾染上RNA酶,因此進行RNA實驗時應(yīng)勤換手套。
3、污染的溶液 用高壓滅菌的水和RNA研究專用的化學(xué)試劑配制溶液,用干烤過的藥匙稱取試劑,將溶液裝入無RNA酶的玻璃器皿。可能的話溶液均應(yīng)用0.1%DEPC于37℃至少處理12小時,然后于100℃加熱15分鐘或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高壓下蒸氣滅菌15分鐘。注:DEPC可與胺類迅速發(fā)生化學(xué)反應(yīng),因些不能用來處理含有Tris 一類的緩沖液。可存幾瓶新的未開封的Tris晶體以制備無RNA酶的溶液。
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