微量加樣器(移液器)的具體操作方法
來源:上海百蕊生物科技有限公司
2011年11月15日 16:27
(一)設定容量值
PipetmanP加樣器容量計讀數(shù)由三位數(shù)字組成(顯示所轉移液體容量),讀數(shù)到個
位數(shù)。EppendorfResearch加樣器容量計讀數(shù)則由四位數(shù)字組成,讀數(shù)到小數(shù)后一位,從上(zui大有效數(shù)字)到下(zui小有效數(shù)字)讀取。利用底部刻度可將容量調節(jié)到更的分度。PipetmanP根據(jù)型號不同,數(shù)字可能是黑色或紅色的。EppendorfResearch加樣器的數(shù)字不同型號均為白色。
轉動加樣器的黑色調節(jié)環(huán)或按鈕的白色調節(jié)旋鈕均可設定容量。用白色調節(jié)旋鈕設定容量比較方便和快速,尤其是穿戴手套時。使用黑色調節(jié)環(huán)可較準確調節(jié)到設定值。
(二)吸液
首先選擇一支合適的吸頭安放在加樣器套筒上。使用P5000及P10ML時,裝吸頭前必在套筒上加插一過濾芯。稍加扭轉壓緊吸頭使之與套筒間無空氣間隙。未裝吸頭的加樣器絕不可用來吸取任何液體。
標準吸液步驟如下:
1.把按鈕壓至*停點。
2.垂直握持加樣器,使吸頭浸入液樣中,浸入液體深度視型號而定。
3.緩慢、平穩(wěn)地松開按鈕,吸液樣。等1s,然后將吸頭提離液面。用藥用吸紙抹去吸嘴外面可能附著的液滴。小心勿觸及吸頭口。
(三)放液
1.將吸頭口貼到容器內壁并保持100~400傾斜2.平穩(wěn)地把按鈕壓到*停點。等1s后再把按鈕壓至第二停點以排出剩余液體。
3.壓住按鈕,同時提起加樣器,使吸頭貼容器壁擦過。
4.松開按鈕。
5.按吸頭彈射器除去吸頭(只有改用不同液體時才需更換吸頭)。
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當裝上一個新吸頭(或改變吸取的容量值)時應預洗吸頭,先吸人1次液樣并將之排回原容器中。
預洗新吸頭能有效提高移液的度和重現(xiàn)性。這是因為*次吸取的液體會在吸頭內壁形成液膜,導致計量誤差。而同一吸頭在連續(xù)操作時液膜相對保持不變,故第2次吸液時誤差即可消除。
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對于密度低于水的液體,可將容量計的讀數(shù)調到低于所需值來進行補償。
例如:用P20移液器轉移10/11血清。先將讀數(shù)調到10//1,吸取后以重量法測定。如實測體積為9.5/1l,即偏差0.5/11,則將讀數(shù)調到10.5Pl并重復1次。如第2次測定仍不夠準確,根據(jù)偏差再作調整。
排放致密或黏稠液體時,宜在*停點多等1~2s再壓到第二停點。
對密度高、黏稠大或揮發(fā)性的液體,推薦使用活塞正移動加樣器。
(六)加樣器吸頭
加樣器吸頭是整個移液系統(tǒng)的有機組成部分,對其基本要求是,必須有高機械、熱力學和化學穩(wěn)定性,且純度高,生產過程純凈,無有機或化學物質(如染料)和重金屬污染。選擇密封良好的環(huán)口、薄壁和嘴口尖細的吸頭,將使得在加樣時,吸頭的安裝或卸脫更加容易。吸頭管壁有彈性,加樣吸液時不會產生漩渦,這樣加樣的精度就更高。吸頭嘴口無毛刺,表面光潔平滑,使得其沾濕性極小,可避免液體滯留外壁引起的誤差。吸頭應與加樣器上吸頭套筒密封完好,可防止由于空氣泄漏而造成加樣精度或準確度的誤差。此外,吸頭還應有液體容積刻度線。D200吸頭在20/1l和100~1處有標記;D1000吸頭在300~1處有標記,D10吸頭在2/A1處有標記。zui后,吸頭應可在121℃下消毒20min。
如果在使用加樣器加樣中,想避免樣品與樣品、樣品與加樣器或樣品與操作人員之間的污染,建議使用Diamond帶濾芯吸頭。Diamond帶濾芯吸頭可以經高溫消毒,其內置濾芯不會損壞。
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實驗室基本上以使用連續(xù)可調的加樣器為主。連續(xù)可調式加樣器在使用時應注意以下幾點,從而使加樣器能發(fā)揮*性能。
1.取液之前,所取液體應在室溫(15—25℃)平衡。
2.操作時要慢和穩(wěn)。
3.連續(xù)可調式加樣器在取樣加樣過程中應注意移液吸頭不能觸及其他物品,以免被污染;移液吸頭盒(架子)、廢液瓶、所取試劑及加樣的樣品管應擺放合理,以方便操作過程、避免污染為原則。
4.連續(xù)可調式加樣器在使用完畢后應置于加樣器架上,遠離潮濕及?蝕性物質。
5.吸頭浸入液體深度要合適,吸液過程盡量保持不變。
6.改吸不同液體、樣品或試劑前要換新吸頭。
7.發(fā)現(xiàn)吸頭內有殘液時必須更換。
8.新吸頭使用前應先預測。
9.為防止液體進入加樣器套筒內,必須注意以下幾點:
①壓放按鈕時保持平穩(wěn);
②加樣器不得倒轉;
?、畚^中有液體時不可將加樣器平放;
?、躊5000及P10ML加樣器一定要加濾芯。
10.勿用油脂等潤滑活塞或密封圈。
11.不可把容量計數(shù)調超其適用范圍。
12.液體溫度與室溫有異時,將吸頭預洗多次再用。
13.移液溫度不得超過70℃。
14.使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后,拆下套筒,用蒸餾水清洗活塞及密封圈。
15.連續(xù)可調式加樣器在使用完畢后應置于加樣器架上,遠離潮濕及腐蝕性物質。
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工作中如發(fā)現(xiàn)加樣器漏氣或計量不準,其可能原因及解決方法為:
1.套筒螺帽松動用手擰緊螺帽。
2.套筒刮花或破裂卸下彈射器,檢查套筒。P2,P10或P20加樣器套筒破損時,活塞也可能變形。安裝套筒時應用手擰緊螺帽。
3.活塞或密封受化學腐蝕更換活塞和密封圈。用蒸餾水洗滌套筒內壁。
發(fā)現(xiàn)套筒內有液體,可依下法清潔:卸下彈射器,擰下螺帽并用蒸餾水洗滌套筒、活塞、密封圈及O形環(huán),待*干燥后重新組裝。
發(fā)現(xiàn)P5000及P10ML濾芯變濕必須更換。
需要時,可將套筒、螺帽和彈射器在121~C消毒20rain。注意密封圈及O形環(huán)不能高溫消毒。
4.發(fā)現(xiàn)吸液時有氣泡
?、賹⒁后w排回原容器;
②檢查吸頭浸入液體是否合適;
?、鄹匚艘后w,如仍有氣泡應更換吸頭。
凡是更換了活塞或操作桿的加樣器需進行全面調校。