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色譜法中,流動相可以是氣體,也可以是液體,由此可分為氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。固定相既可以是固體,也可以是涂在固體上的液體,由此又可將氣相色譜法和液相色譜法分為氣-液色譜、氣-固色譜、液-固色譜、液-液色譜。
另外,還有一種超臨界流體色譜法(supercritical fluid chromatography SFC),超臨界流體色譜是值用超臨界流體做流通相,以固體吸附劑(如硅膠)或鍵合到載體(或毛細(xì)管壁)上的高聚物為固定相的色譜法。
超臨界流體是在高于臨界壓力和臨界溫度時的一種物質(zhì)狀態(tài),它既不是氣體也不是液體,但兼有氣體和液體的某些性質(zhì)(藥物色譜分析 主編丁黎 人民衛(wèi)生出版社2008年7月版)。
高效液相色譜法(HPLC)是繼氣相色譜之后,70年代初期發(fā)展起來的一種以液體做流動相的新色譜技術(shù)。
高效液相色譜是在氣相色譜和經(jīng)典色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的?,F(xiàn)代液相色譜和經(jīng)典液相色譜沒有本質(zhì)的區(qū)別。不同點(diǎn)僅僅是現(xiàn)代液相色譜比經(jīng)典液相色譜有較高的效率和實(shí)現(xiàn)了自動化 操作。
經(jīng)典的液相色譜法,流動相在常壓下輸送,所用的固定相柱效低,分析周期長。而現(xiàn)代液相色譜法引用了氣相色譜的理論,流動相改為高壓輸送(高輸送壓力可達(dá)4.9´107Pa);
色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜(每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬);
同時柱后連有高靈敏度的檢測器,可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測。因此,高效液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動化等特點(diǎn)。所以人們稱它為高壓、高速、高效或現(xiàn)代液相色譜法。
HPLC 系統(tǒng)一般由高效液相色譜儀主要由進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
其中高壓、色譜柱、檢測器是關(guān)鍵部件。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、預(yù)柱或保護(hù)柱、柱溫控制器等,現(xiàn)代 HPLC 儀還有微機(jī)控制系統(tǒng),進(jìn)行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型 HPLC 儀還備有自動餾分收集裝置。
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